实体瘤组织单细胞悬液制备及培养方案一、 单细胞悬液制备(一) 仪器、材料及试剂1. 仪器：(1) CO2培养箱（调至37），离心机，水浴锅（37），血球计数板；(2) 无菌器械：细胞培养瓶，50 ml离心管，平皿，吸管，移液管，纱布，200目/ 300目尼龙滤网，手术器械。2. 材料：肿瘤造模成功的大鼠3. 试剂：RPMI1640 培养基（含10%小牛血清），0.25%胰酶，Hanks液/PBS缓冲液，碘酒附：Hanks液配方： KH2PO4 ：0.06g；NaCl：8.0g；NaHCO3：0.35g；KCl：0.4g；Glucose：1.0g； Na2HPO4H2O：0.06g；加H2O定容至 1000 ml注：Hanks液可以高压灭菌，4下保存。(二) 操作步骤 机械-胰酶消化法1. 取材：制备实体瘤单细胞悬液，肿瘤取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，挑选活力较好的部位。将大鼠麻醉，置75%酒精泡3-5 min（时间不能过长，以免酒精从口和肛门浸入体内），固定
