In situ hybridization final edition第一部分:1 固定(第一天,下午)1) 用DEPC水配制8%多聚甲醛(粉末)(作为储备液,4C可保存1月):2) 多聚甲醛(粉末)8g,溶解于100ml DEPC水中,60C孵育30min(此时多聚甲醛不溶);加入10N NaOH 15ul,调节pH值于7.4左右,用手振荡,多聚甲醛将快速溶解;3) 用8%多聚甲醛储备液和PBS缓冲液配制4%多聚甲醛:8%多聚甲醛储备液50ml、10PBS(DEPC配制)10ml、DEPC水40ml(4%的多聚甲醛作为工作液在1周内使用);4) 将组织块放置于10体积的4%多聚甲醛溶液中固定1-2h(室温),其间缓慢摇动,4C放置过夜(16h,其间缓慢摇动)。注意:固定时,一定要保证多聚甲醛和材料中水分的充分交换,否则会造成材料不能很好固定!2 脱水(第二天,早晨):按下列顺序对材料进行脱水:1 PBS (DEPC) 5min 2次70%乙醇(DEPC) 5min 80%乙醇(DEPC) 5mi