小鼠单抗腹水纯化步骤2页.docx

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小鼠单抗腹水纯化一、 初纯辛酸硫酸铵法【原理】在酸性条件下(pH=4.5),非IgG的蛋白成分(包括白蛋白,部分Ig),能被辛酸等短链脂肪酸沉淀,上清中剩余的蛋白主要为IgG,再用硫酸铵沉淀上清,即可获得纯度较高的IgG。辛酸硫酸铵法比硫酸铵法能或得更高纯度的IgG。【溶液配制】1、60mM的醋酸缓冲液(pH4.0) 200ml取0.2M醋酸缓冲液母液60ml,加ddH2O至200ml,调pH为4.04.0.2M醋酸缓冲液母液60ml:0.2mM乙酸 49.2ml,折合566l的冰乙酸。 0.2M乙酸钠10.8ml(0.2M乙酸钠:2.72g三水合乙酸钠(MW136.08),溶解于100ml ddH2O中)2、10*PBS (0.1M,pH7.4) 500ml取0.2M PB母液250ml加水定容到500ml,加入45gNaCl(使NaCl终浓度为9%),此时pH约为7.35,调pH至7.4.0.2M PB母液250ml:0.2M Na2HPO4 202.5ml (折

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