1、本品只能用于科学研究，不能用于临床检测本品于GMP标准下生产人外周血淋巴细胞分离液说明书【包装规格】200ml/瓶【货号】LTS1077-1【实验前准备】A适用仪器最大离心力可达1200g的水平转子离心机B耗材产品名称 产品货号 产地15ml离心管散装 339650 美国 NUNC15ml离心管架装 339651 美国 NUNC50ml离心管散装 339652 美国 NUNC339653 美国 NUNC50ml离心管架装无菌胶头滴管或塑料滴管【检验方法】 全过程样本、试剂及实验环境均需在202的条件下进行。 首先根据样本量大小，分以下几种情况：一、使用15ml离心管时： 情况A：血液样本量小于
2、3ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，加入3ml分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件 需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴 细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。本品只能用于科
3、学研究，不能用于临床检测本品于GMP标准下生产6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为3-6ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，450-650g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200g）。3.离心后，此时离心管中
4、由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴 细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。二、使用50ml离心管时：情况A：血液样本量为6-10ml时，实验方法如下：1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用
5、吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200g）。 3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。本品只能用于科学研究，不能用于临床检测本品于GMP标准下
6、生产6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为10-20ml时，实验方法如下：1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-1100g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200g）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第
7、二层为环状乳白色淋巴 细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。 6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 【注意事项】1.全过程样本、试剂及实验环境均需在202的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后
8、分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。4.吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。本品只能用于科学研究，不能用于临床检测本品于GMP标准下生产6.当血液样本粘度过高需稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血
9、液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。【储存条件及有效期】18-25保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。【参考值（参考范围）】本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于80%。下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。红细胞 白细胞 血小板（ 4.0-10.0） 109含量（个/L） 4.0-5.5）10 12 11中性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 （1.0-3.0）1050%-70% 20%-40% 3%-8%【相关实验技术方案】1.所获得淋巴细胞的培养技术。2.所获得淋巴
10、细胞的核酸提取技术。3.所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术D.PCR技术注：上述技术方案详情请登上海研谨生物公司官网搜索“细胞 分离、纯化、扩增及鉴定指导手册”，并在说明书项目栏下下载使用。 【可能存在的问题及解决方法】1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示： 出现情况 出现原因离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 转速过小或离心时间过短离心后目的细胞存在于分离液中 转速过大或离心时间过长离心后白环层弥散 细胞密度过大建议解决方案适当增减转速调整细胞密度本品只能用于科学研究，不能用于临床检测本品于GMP标准下生产离心后白环层太浅
11、或看不见 细胞密度过小2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。3.本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于400g，最大不得大于1200g。离心时间以20-30min为准。注：上述技术方案详情请登陆上海研谨生物科技公司官网搜索“细胞分离、纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册”，并在说明书项目栏下下载使用。
