流式细胞术的设门方法(共3页).docx

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流式细胞术数据分析目的就是需要确定所要研究的目的细胞器,这就涉及到设门。设门就是划定某一区域的细胞群体,对其单独加以分析或分选。门的形状可任意,方法有几种:(1)阈值设门。FSC(前向散射光)是最常用的阈值参数。FSC 和细胞的大小正相关。用FSC 设阈值,可以使低于该阈值的细胞碎片等其他杂质的信号不被处理。(2)散射光设门。以FSC 和SSC(侧向散射光)联合设门较常用。其最大优点是可以排除碎片或噪声的干扰。可以根据FSC vs SSC 散点图上不同细胞分布不同来设门目的细胞群。另外还有荧光设门、反向设门和组合设门。流式细胞术的数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。应该注意到设门是一个主观行为,是人为做出的决定,不同的人设门会存在很大差异,它是流式细胞术中最难掌握的技术。因此,对设门有2 点需要把握:首先,设门尽可能客观;其次,应该认识到设门需要主观决策。为了尽量减少主观判断带来的误差,最好分选一些细胞用显微镜观察来进一步确认门的客观性和准确性。:通过流式细胞术分析细胞样品时,欲获得更加准确的分析结果,应用最优化的设门策略非常重要。要考虑的因素包括:1)排

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