流式细胞术步骤(共2页).doc

上传人:晟*** 文档编号:6916625 上传时间:2021-09-15 格式:DOC 页数:2 大小:25KB
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利用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡1. 细胞按每孔4105 个的密度接种于60 mm细胞培养皿内,培养过夜后,用相应药物处理细胞。(设置实验组和对照组,实验组依辛伐他汀浓度分为3组,2mol/L、5mol/L、10mol/L辛伐他汀组正常对照组(NC组):胰岛素终浓度0.058mg/LA组:辛伐他汀终浓度2mol/L+胰岛素终浓度 0.058mg/L;B组:辛伐他汀终浓度5mol/L+胰岛素终浓度0.058mg/L;C组:辛伐他汀终浓度10mol/L+胰岛素终浓度0.058mg/L;于37,5%CO2培养箱中孵育48h)2. 胰酶消化收集细胞,并用1 mL PBS缓冲液清洗剩余细胞一次,全部加入15ML管中。3. 800 rpm离心5分钟,去除上清,加5 mL PBS缓冲液重悬细胞,再次离心弃上清,重复两次,最后重悬细胞于0.5mL PBS中。4. 用低速振荡器边震动边加入5 mL预冷的70%乙醇,固定,4过夜。5. 次日将固定好的细胞以1000 rpm的转速离心5分钟,弃上清,加入4 mL PBS清洗一次,用0.4 mL

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