漆酶活性测定方法(共7页).docx

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资源描述

一、 测 O2法 漆酶是一种多酚氧化酶,它所催化的反应过程中有O z 的介入。测量反应的耗 氧 量既可间接地推知漆酶的活性。较早建立的瓦氏呼吸器检测法便是基于这一 原 理。这一方法后来改进为利用氧电极来测量耗氧量,如弗罗纳等以愈创木酚为底物,利用氧电 极测定了漆酶催化反应过程中的耗氧量,并将 1个漆酶活性单位定义为PH6 o 及2 5 条件下以愈刨木酚作为电子供体时消耗1. 0 mo lO2所需要的酶量。亦可取醌醇作底物利用氧电极测定漆酶的活性。郭明高提出了测定生漆漆酶活性的吸氧法。即将生漆溶于甲苯,测定酶促吸氧速度和累计酶促吸氧量, 同时利用碱促吸氧法测定反应前后漆酚浓度的变化,从而可以求得漆酚浓度衰减的规律 及漆酶促吸氧的克分子比。此法的特点是反应时漆酶处于其天然存l 在的状态而反应底物又恰为漆酶的天然底物漆酚,这在漆酶测活研究中尚属首倒 2 1 。 漆树酶活力检测用0.1molL-1磷酸盐缓冲液与有机溶剂配成一定体积的底物,其浓度为13510 molL-1。分别移取3mL于1cm测量池和参比池中,恒温水浴中预热 10min注入20L

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