人白三烯B4LTB4酶联免疫分析ELISA.DOC

上传人:天*** 文档编号:693930 上传时间:2018-10-28 格式:DOC 页数:3 大小:47.50KB
下载 相关 举报
人白三烯B4LTB4酶联免疫分析ELISA.DOC_第1页
第1页 / 共3页
人白三烯B4LTB4酶联免疫分析ELISA.DOC_第2页
第2页 / 共3页
人白三烯B4LTB4酶联免疫分析ELISA.DOC_第3页
第3页 / 共3页
亲,该文档总共3页,全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述

1、人白三烯B4(LTB4)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人白三烯B4(LTB4)含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白三烯B4(LTB4)水平。用纯化的人白三烯B4(LTB4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白三烯B4(LTB4),再与HRP 标记的白三烯 B4(LTB4)抗体结合,形成抗体- 抗原- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白三烯B4(LTB4)呈正相关。用

2、酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人白三烯B4(LTB4) 浓度。试剂盒组成:试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份 封板膜 2 片(48) 2 片(96) 密封袋 1 个 1 个 酶标包被板 148 196 2-8保存标准品 0.5ml1 瓶 0.5ml1 瓶 2-8保存标准品稀释液 1.5ml1 瓶 1.5ml1 瓶 2-8保存酶标试剂 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存样品稀释液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存显色剂 A 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8保存显色剂 B 液 3 ml1 瓶 6

3、ml1 瓶 2-8保存终止液 3ml1 瓶 6ml1 瓶 2-8保存浓缩洗涤液 (20ml20 倍)1 瓶 (20ml30 倍) 1 瓶 2-8保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/ 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3.尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程

4、中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。

5、离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。操作步骤:1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品100l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100l 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50l 弃掉,再各取50l 分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50l 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50l,混匀

6、后从第七、第八孔中分别取50l 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l,混匀后从第九第十孔中各取50l 弃掉。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37温育30 分钟。4. 配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T 的20 倍)倍稀释后备用。5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去

7、,如此重复5 次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀, 37避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。注意事项:1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3

8、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n5)。5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6 底物请避光保存。7 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。计算:以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8。2有效期:6 个月

展开阅读全文
相关资源
相关搜索

当前位置:首页 > 重点行业资料库 > 1

Copyright © 2018-2021 Wenke99.com All rights reserved

工信部备案号浙ICP备20026746号-2  

公安局备案号:浙公网安备33038302330469号

本站为C2C交文档易平台,即用户上传的文档直接卖给下载用户,本站只是网络服务中间平台,所有原创文档下载所得归上传人所有,若您发现上传作品侵犯了您的权利,请立刻联系网站客服并提供证据,平台将在3个工作日内予以改正。