红海榄化学成分研究.DOC

1、红海榄化学成分研究梁成钦 1，龚受基 1，周先丽 1，徐庆 1，苏小建 2 ，朱秋燕 2（1. 广西桂林医学院，广西 桂林 541004；2. 广西师范大学环境与资源学院，广西 桂林 541004）摘要 目的：研究红海榄的化学成分。方法：利用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化；采用化合物的理化性质和 NMR、IR、MS等波谱方法对各单体化合物进行结构鉴定。结果：从红海榄中分离得到了7 个化合物，它们分别是：-香树脂醇（1） 、豆甾醇（2） 、白桦脂酸（3） 、胡萝卜甙（4） 、芦丁（ 5） 、D-甘露醇（6）和六十炔烃（7） 。结论：其中化合物（1） 、 （2

2、） 、 （3） 、 （6）和（ 7）为首次从该植物中分离得到。关键词 红海榄；化学成分；结构鉴定中图分类号：R284.1 文献标识码：B 文章编号： Studies on Chemical Constituents of Rhizophora stylosaLIANG Cheng-qin1, GONG Shou-ji1, ZHOU Xian-li, XU Qing1 , SU Xiao-jian2*, Zhu Qiu-yan2(1. Guilin Medical College, Guilin 541004,China; 2. College of Environment and Resour

3、ces of Guangxi Normal University, Guilin 541004,China)Abstract Objective: To study the chemical constituents of Rhizophora stylosa. Methods: The constituents were isolated and purified by silica gel column chromatograph and Sephadex LH-20 column chromatograph. Their structures were elucidated throug

4、h their physicochemical properties and spectroscopic analysis such as 1H-NMR, 13C-NMR and FT-IR. Results: Eight compounds were isolated from Rhizophora stylosa, they were identified as -amyrin(1), Stigmasterol(2), Betulinic acid (3), Daucosterol(4), Rutin(5), D-Mannitol(6) and sixty Alkyne (7). Conc

5、lusion: Compounds （1）,（2）,（3）,（6）and（7） were isolated from the plant for the first time. Key words Rhizophora stylosa; Chemical constituents; Structure identification红海榄 (Rhizophora stylosa) 是红树科 (Rhizophraceae)中的一种红树林植物，生长收稿日期 通讯作者 苏小建， Tel:13707835706，E-mail: 作者简介 梁成钦(1977-),男，助理研究员，硕士，研究方向：天然药物化学

6、研究；Tel:13788571020，E-mail:于热带和亚热带沿海潮间带，具有解毒利咽，清热利湿，凉血止血，敛肺止咳，涩肠止泻等药用功效，在东南亚沿海具有较长的药用历史 1 。目前，世界各国对红树植物的活性物质结构及其药理研究表明， 红树植物含萜类、多糖和生物碱等化合物，具有抗艾滋病、抗肿瘤、抑菌和抗氧化等活性 2。从报道得知，红海榄含有二萜、三萜、甾体、黄酮和生物碱等化合物 3。目前有关红海榄化学成分的研究并不多 4，所以为有效保护和合理开发我国红海榄资源，从中寻找具有药用价值的生物活性成分，我们对红海榄化学成分进行进一步研究，并从中分离得到了 7个化合物，分别为 -香树脂醇（1） 、豆

7、甾醇（2） 、白桦脂酸（3） 、胡萝卜甙（4） 、芦丁（5） 、D-甘露醇（6）和六十炔烃（7） 。其中化合物（1） 、（2） 、 （3） 、 （6）和（7）为首次从该植物中分离得到。1 材料红外光谱仪（美国Nicolet公司Avatar 360 FT-IR） ；核磁共振仪（瑞士Bruker公司ADVANCE AV 500 MHz） ；X-4 型显微熔点测定仪(温度计未校正，北京泰克仪器有限公司)；薄层层析用硅胶GF254、柱层析用硅胶（200300目） （青岛海洋化工厂） ，其他试剂均为国产分析纯。 红海榄采自广西北海合浦，并由中国科学院广西桂林植物研究所黄定中高工鉴定为红海榄(Rhizop

8、hora stylosa)，样品标本保存于桂林医学院科学实验中心。2 提取分离红海榄树叶(3.5 kg)和枝(4.0 kg)，自然风干后，分别用 80 %乙醇回流提取 3次（固液比 18） ，每次提取 1 h，合并提取液并减压回收溶剂至无酒精味，分别得叶和枝浓缩液，然后再分别依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压浓缩萃取液得各萃取部位浸膏。将叶石油醚萃取物(3.5 g)进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯（100010）进行梯度洗脱，所得到流分再反复硅胶柱层析，得到化合物 1(16.7 mg)和化合物 2(12.5 mg)。将叶正丁醇萃取物（16.587 g）进行硅胶柱层析，分别用氯

9、仿-甲醇（8020，6040，0100）进行洗脱，所得流分反复进行 Sephadex LH-20柱层析，用甲醇进行洗脱，得到化合物 5(34.5 mg)和化合物 6(26.8 mg)。将枝氯仿萃取物（10.6 g）进行硅胶（200-300 目）柱层析，用氯仿-丙酮（100010010） 、乙酸乙酯-甲醇(100010010)依次进行梯度洗脱，所得流分再反复经硅胶柱层析和 Sephadex LH-20柱层析，得到化合物 7（7.6 mg） ，化合物 3（8.4 mg） ，化合物 4(6.6 mg)。3 结构鉴定化合物 1 白色粉末（乙酸乙酯） ，mp：192.0193.0 。以石油醚乙酸乙酯=5

10、1展开，Rf=0.26；石油醚乙酸乙酯=41 展开，Rf=0.38，碘显色，均为单一斑点。TLC 板展开后，喷以 10%硫酸乙醇溶液，加热显紫红色。ESI-MS m/z 425M-H -。IR（KBr 压片法）cm -1: 3413(OH)，2946， 2853，1465，1387(CH 3)。 1H NMR谱中(CDCl 3，500MHz)，0. 82(2)、0.86、0. 89、0. 96、0. 99、1. 02、1. 16(各 3H，s)，分别为 8个甲基质子信号，3. 25(1H， dd，J=5.0，10.0Hz，H-3)，5. 21(1H, br. s, H-12)。 13C-NMR

11、谱中(CDCl 3)，共给出 30个碳信号，其中 145. 2和 121. 8为一对双键碳信号，79. 0为连氧次甲基碳信号，15. 056. 0有 27个 SP3杂化的碳信号， 13C NMR数据及归属见表 1。以上数据与文献5报道的基本一致，故鉴定该化合物为 -香树脂醇(-amyrin，C 30H50O)。化合物 2 无色片状晶体（乙酸乙酯） ，mp：145.0147.0。ESI-MS m/z 413MH 。以石油醚乙酸乙酯=71 展开，Rf=0.38；石油醚 乙酸乙酯=41 展开，Rf=0.43，碘显色，均为单一斑点。TLC 板展开后，喷以 10%硫酸乙醇溶液，加热显紫红色。IR（KBr

12、 压片法）cm -1： 3419 (OH)，3030，2948，2851，1464 ，1381，1056； 13C NMR数据及归属见表 1，此数据与文献6报道的基本一致，故鉴定该化合物为豆甾醇（Stigmsterol，C 29H48O） 。化合物 3 无色针状晶体(氯仿-甲醇)，mp：274276。 1HNMR(CDCl3，500MHz) H(ppm): 0.64(3H，s), 0.75(3H，s), 0.86(6H，s), 0.92(3H ，s), 1.63(3H, s，H-29), 分别为 6个甲基质子信号。 13C NMR数据及归属见表 1，此数据与文献 7报道的基本一致，故鉴定该化合

13、物为白桦脂酸(Betulinic acid，C 30H48O3)。 化合物 4 白色无定形粉末（甲醇） ，mp：293.5295.4 ，Libermann-burchard 反应为阳性，IR（KBr 压片法）cm -1：3362 (OH)，1647，1653(C=C)，2928、2850 (CH3)，1458，1367 (CH3)，2863 (CH2)，1023 (C-O)； 1HNMR(DMSO-d6，500 MHz)中，5. 41(1H, br. s, H-6)，4.32(1H，d，J=7.7 Hz，H-1) ，0.75(3H，s)、0.90(9H，m)，0.99(3H，s)、1.06(3

14、H，s)，分别为 6个甲基质子信号。此化合物的 13C NMR数据及归属见表 1，此数据与文献8报道的基本一致，故鉴定该化合物为胡萝卜甙（Daucosterol ，C 35H60O6） 。表 1化合物 14 的 13C NMR的数据归属（化合物 1、2、3： CDCl 3； 化合物 4：DMSO-d6，500 MHz）Table 1 13C NMR spectra data of Compound 14（Compound 1，2，3: CDCl 3; Compound 4: DMSO-d6，500 MHz）No. 1 2 3 4 No. 1 2 3 4 No. 4C-1 38.6 37.3 3

15、8.837.3 C-1627.028.9 32.2 40.4C-1101.4C-2 27.3 31.7 27.529.7 C-1732.556.1 55.9 56.0C-273.9C-3 79.0 71.8 77.379.0 C-1847.312.0 47.1 12.1C-379.6C-4 38.9 42.4 39.038.8 C-1946.919.4 49.1 19.5C-470.6C-5 55.2 140.855.4140.9C-2031.140.4 150.836.0C-579.3C-6 18.4 121.718.4121.6C-2134.821.0 29.7 19.4C-661.6C-

16、7 32.7 31.9 34.431.9 C-2237.0138.337.2 33.9C-8 38.8 32.0 40.731.9 C-2328.1129.428.6 36.7C-9 47.7 50.2 50.450.1 C-2415.551.2 16.2 45.7C-1037.2 36.5 37.226.0 C-2515.631.9 16.2 29.2C-1123.5 20.2 20.921.1 C-2616.818.9 16.4 19.0C-12121.839.8 25.628.2 C-2726.021.0 14.8 20.1C-13145.242.3 38.142.3 C-2828.42

17、5.4 177.723.1C-1441.8 56.8 42.556.7 C-2933.311.9 19.4 12.2C-1526.2 24.4 30.624.3 C-3023.7110.0化合物 5 浅黄色粉末(甲醇)， mp：177.0178.0， HCl-Mg 反应呈紫色， Molish反应界面呈紫红色，指示该化合物为黄酮的苷类化合物。ESI-MS m/z 609M-H -。IR(KBr 压片法) cm-1：3352 (OH)，2939，1657 (C=O)，1602, 1572, 1505。 1HNMR(CDCl3，500 MHz)12.58(1H，S，5-OH)， 10.83(1H，S

18、，7-OH)，9.65(1H，S，4-OH)，9.17(1H，S，3-OH)， 5.27(1H，d，J=3.5，2-OH)， 5.09(1H，d，J=3.9，3-OH)， 5.06(1H，d，J=5.7，4-OH)，4.51(1H，S, 2-OH)，4.36(1H，S， 3-OH)，4.32(1H，S， 4-OH)，7.53(1H，d，J=8.1，H-6)，7.52(1H，S，H-2)，6.83(1H，d， J=8.1，H-5)，6.38(1H，d，J=1.5，H-8)，6.18(1H，d，J=1.5，H-6)，5.33(1H，d，J=6.9，H-1) 和 4.38(1H，S， H-1)，0.

19、98(3H，d，J=6.1)，3.04-4.00(葡萄糖基和鼠李糖吡喃环上的 10个 H)。13CNMR(CDCl3，500 MHz) 177.8（C-4） ，164.5（C-7） ，161.7 (C-5)，157.1 (C-2)，156.9 (C-9)， 148.9 (C-4 )，145. (2C-3)，133.8 (C-3)； 122.0 (C-6)， 121.7 (C-1)，116.7 (C-2)， 115.7 (C-5)，104.4 (C-10)， 101.7 (C-1)，101.2 (C-1)，99.1 (C-6)，94.0 (C-8)；76.9 (C-3)， 76.3 (C-5)，

20、 74.6 (C-2)， 72.3 (C-4)， 71.1 (C-4)，70.8 (C-2)， 70.5 (C-3)， 68.7 (C-5)，67.5 (C-6)，18.2 (C-6)。上述数据与文献9基本一致，故鉴定该化合物为芦丁（Rutin，C 27H30O16） 。化合物 6 白色针状晶体（甲醇） ，该化合物在加热条件下溶于甲醇。mp：167.81685 ，Molish 反应阳性，易溶于水，难溶于低极性有机溶剂。IR(KBr 压片法)cm -1：3400-3200(OH)，2948(CH 2)，1419(CH 2)，1083、1020(C-O)，930(OH)。由1HNMR(DMSO-d

21、6， ，500 MHz)谱数据可知，处于较低场的 :4.40(2 H，d，J=5.5Hz，C 2，5 -OH)，4.32(2 H，t，J=5.0 Hz，C 1，6 -OH)，4.12(2 H，d ，J=7.2 Hz，C 3，4 -OH)，分别是醇羟基的氢质子，与碳上所连质子明显偶合；而处于较高场 3.303.65 处的质子峰，推测为其余氢质子的堆积峰。结合 13CNMR(DMSO-d6， ，500 MHz)谱可知分子结构具有对称性，：71.8(2C，C-3，C-4)，70.2(2C，C-2，C-5)，64.3(2C，C-1，C-6)，以上数据与文献10报道的数据基本一致，所以确定该化合物为 D

22、-甘露醇（D -Mannitol， C6H14O6） 。化合物 7 白色粉末（氯仿） ，mp：58.660.2。APCI-MS m/z 839M+H+。IR（KBr 压片法）cm -1：2918，2849，2115，1473，723。 1HNMR (CDCl3，500 MHz)显示有四组氢信号， H（ppm）：2.37（t，2H） ， 1.66（m，2H） ， 1.28（m，44H） ， 0.90（t ，3H） 。 1H NMR在化学位移 1.28 ppm和 0.90 ppm两个高场区有信号峰，并在化学位移 0.90 ppm处是一变形的三重峰，此为长链脂肪烃的多个亚甲基所产生的次级效应 11

23、。结合 IR谱图分析，由于 3000 cm-1以上无不饱和烃的 C-H 伸缩振动吸收峰，说明该不饱和键为三键，且不在端位。在 2115 cm-1附近区域无 CC 的伸缩振动吸收峰，说明是十分对称的一炔烃或累积多炔烃。结合氢谱和质谱，推测出分子中只含一个CC 键。通过上述分析，确定该化合物为一种六十炔烃，分子式为 C60H118。参考文献1 林鹏. 中国红树林研究进展. 厦门大学学报(自然科学版)，2001，40(2)：592.2 王友绍，何 磊，王清吉，等. 药用红树植物的化学成分及其药理研究进展J. 中国海洋药物，2004，98：27.3 杨旭红，李怀标，陈虹等. 红海榄叶的化学组成及其生物

24、活性J. 药学学报， 2008， 43(9)：974.4 宋文东，范润珍，奚旦立. 红树植物红海榄叶化学组成研究J. 海洋湖沼通报，2008(04)：13.5 张慧，翟延君，初正云，等. 乌骨藤中五环三萜类化合物的分离鉴定J. 分析化学研究简报，2007， 9(35)：1377.6 李婷婷，王德智，钟惠民. 植物狮子尾的化学成分J. 青岛科技大学学报(自然科学版)，2007， 4(28)：294.7 白丽明，王金兰，高立娣，等. 日本夹竹桃化学成分及细胞毒活性研究J. 安徽农业科学，2009， 37(20)：9480.8 王湛昌，林文翰，张亮，等. 福建浮宫红海榄(Rhizophora stylosa)次生代谢产物研究J. 厦门大学学报(自然科学版)，2006，6(45)：873.9 李宝才，闻克威，董玉莲，等. 秋茄叶中卢丁的分离与鉴定J. 热带海洋学报，2002， 3(21)：90.10 蒋海强，王建平，刘玉红，等.鬼针草化学成分的分离和鉴定J.食品与药品，2008， 09(10)：1517. 11 宁永成编著. 有机化合物结构鉴定与有机波谱学M. 北京: 科学技术出版社, 2000, 66.