直尺 20微升枪头(灭菌) 无血清培养基 PBS准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)流程:1。先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.51cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2。在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。3。第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。4。用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。5。放入37度5%co2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。NOTE6空板可以保证有相当距离的平直划痕,我觉得挺不错的。而且因为有5条定位线,与划痕相交,这样就有10个可固定监测点,不作重复,误差也很小。如果你连续监测24小时,你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移,你可以先用丝裂霉素(1ug/ml)处理一小时,抑制细胞的分裂,这样你的结果就是细胞迁移的作用了。照片拍完