细胞培养—传代—冻存—western-blot等实验相关步骤(共7页).doc

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资源描述

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结实验一:细胞传代培养 材料:15ml离心管、枪(头1ml、200ul、10ul)、无菌吸管、培养瓶、含10%FBS的RPMI1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等 步骤:(以下均在超净台内,酒精灯旁操作)(SKOV-3)1、 打开超净台,将离心管、枪(头)、吸管等工具置于紫外线下照射30min;含10%FBS的RPMI1640、trypsin、PBS放在37C水浴恒温箱中预热。2、 取一个生长良好的细胞培养瓶(密度适中,细胞成梭形连接,贴壁良好),弃旧培养基,PBS 2ml 清洗2次(切勿用力吹打)。3、 用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入,然后放平培养瓶,使贴壁细胞与trypsin充分接触,置于CO2培养箱2min左右(时间不能太长,以免损伤细胞)。 4、往培养瓶中加入1640 12ml,随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中,离心1000 r/min,5min。 5、弃上清液,加入少量10%FBS的1640培养基使成

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