细胞样品收集注意事项2页.doc

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细胞样品收集方法一、 蛋白以T75培养瓶为例1. 把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中,用PBS洗涤1-2次(PBS需彻底吸干,洗液时把板倾斜),每次洗涤时,均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管,每培养瓶细胞准备一个离心管,切勿混淆;2. 每培养瓶加入300ul RIPA裂解液(加入裂解液时,一定用放平,是细胞与裂解液充分接触), 把上述离心管离心(水平转角离心机,1000RPM, 8min),彻底移除上清,加入300ul RIPA裂解液,吹打12下后,把裂解液转移至同一培养瓶中,则培养瓶中合并有200ul,盖好盖子,用封口膜封口后置于-80保存;注意做好标记!(如果用PBS洗涤后,细胞未飘起,则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶)备注:给你提供的RIPA裂解液用EP管装,每管990ul,同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快,做好一瓶,放好一瓶!强烈建议一瓶一瓶的做。表一培养器皿RIPA裂解液用量备注6孔板150-300ul根据细胞的密度适当调整用量,Trizol的最少用量为

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