细胞总RNA提取(共2页).docx

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细胞总RNA的提取一、准备1、物品:Trizol、氯仿(三氯甲烷)、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管2、打开冷冻离心机4预冷二、操作步骤:将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室。1、取出EP管、做好标记2、取出细胞、收集上清保存备用3、用冷PBS冲洗细胞两次4、加入1ml Trizol(24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min)5、将裂解液转移至1.5ml灭酶EP管中,用黄枪头加入氯仿0.2ml(1/5 Trizol体积),用手剧烈震摇15秒,置室温5min(生化:3mindxyer:15min),分层6、4、12000g(12300rcf)离心15min,可见分层。7、用黄枪头小心收集上层水相约0.5ml置于另一1.5ml灭酶EP管中(确保不要吸入中间层和有机相)。8、各管分别加入0.5ml异丙醇(等体积),用力摇匀,置室温10min。(提前将异丙醇4预冷,或混匀后置-20

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