细胞爬片、固定及免疫荧光的操作步骤2页.docx

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细胞爬片、固定及免疫荧光的操作步骤1. 爬片的准备1) 爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;用盖玻片时,可根据自己的需要用小砂轮或玻璃刀剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;2) 将剪裁好的爬片,置于浓硫酸中浸泡过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,然后置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍,放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后高压消毒。高压消毒后取出放入烘箱中烘干,烘干后可放入超净台中备用。3) 可将爬片用多聚赖氨酸处理,以使细胞与爬片结合更牢固。1mg/ml的多聚赖氨酸用0.22um的滤器过滤除菌后分装于经过无菌处理的1ml细胞冻存管内保存在4里,三个月内仍然可以使用。用时将高压灭菌过的爬片放到0.1mg/ml的多聚赖氨酸溶液内浸泡5min,无菌晾干即可(放入培养板孔内注意爬片的正反面)。或将爬片铺于培养皿中,将多聚赖氨酸溶液滴于爬片上,室温10分钟后,吸除玻片上的溶液,在超静台内晾干后使用。储存、稀释和吸取多聚赖氨酸要使用塑料制品。2. 细胞爬片1) 胰酶消化细胞后重悬细胞于完全培养基中,充分吹打,使之成单细胞悬液,计数。2) 根据自己

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