细胞迁移-划痕实验12页.doc

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细胞迁移实验技术 划痕实验一、基本原理 细胞划痕(修复)法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上, 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间(例如72h),取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。二、操作步骤 1先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.51cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2在孔中加入约5105个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。3第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。4PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培

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