组织培养细胞的裂解 对于组织培养中生长的细胞,最有效的裂解方法是用去污剂进行处理。虽然有多种去污剂可用于裂解细胞,但最常用的是TritonX100或NP40等非离子型去污剂。非离子型去污剂能溶解胞质和细胞膜,破坏分子间许多微弱的结合键,并能溶解大部分经常研究的蛋白质抗原,但对于大分子多聚抗原则无效,在大多数情况下该抗原也是难以研究的。浓度介于011的去污剂即可满足几乎所有溶解需求。非离子型去污剂裂解液一般补充等离子浓度的盐和接近中性的pH。 在某些情况下,需要较剧烈的抽提条件以释出所研究的抗原或除去微弱的相关蛋白。此时,推荐使用RIPA裂解缓冲液,该体系含离子型和非离子型去污剂,具有相当大的变性能力。除细胞内不溶性蛋白外所有可溶性蛋白分子均可释出,并能破坏大部分非共价的相互作用。 除非有特殊原因,推荐在裂解缓冲体系中加入蛋白酶抑制剂混合液。在新抗原研究的早期使用蛋白酶抑制剂总是有利的。在该蛋白已被定性后,可以进行实验以了解这些抑制剂是否在所有情况下都必需。如前所述,终止蛋白酶作用的最好方法是在免疫沉淀的全部过程中溶液保持低