实验二 聚合酶链式反应(PCR)一、 实验原理聚合酶链式反应(PCR)是利用DNA片段旁侧两个短的单链引物,在体外快速扩增特异DNA片段的技术。它应用热稳定的聚合酶,通过双链DNA模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环,DNA片段以指数方式增加了百万倍。从非常微量的DNA甚至单个细胞所含有的DNA起始,可产生ug量的PCR产物。二、 器材与试剂1.器材:移液器,EP管,热盖PCR仪,电泳仪,量筒,锥形瓶,微波炉,电子天平,紫外照色仪2.试剂:引物,模板,Taq DNA聚合酶,原料(dNTPs),缓冲液与Mg2+,H2O, 2*PCRmix溶液,DNA染料三、 实验步骤PCR反应体系的建立取离心管,依次加入试剂混匀1H2O 12l2模板 1l3引物T7 1l4引物 sp6 1l52*PCRmix 15lPCR仪的热循环反应把离心管放入PCR仪中,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至94左右一定时间后,使模板