1、恒远第六届 Elisa 技术经验讲座内容公布于 2015 年 7 月 20 日，上海恒远免疫学研究检测中心第六届 Elisa 技术经验讲座成功举办，于日前，我司郭经理将主要重点内容整理出，在此分享给大家。下面是 Elisa 经验讲座内容公布：第一、亲和素生物素：先亲和素先包被载体，加入生物素化的 DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。第二、小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。第三、
2、脂类物质：可将其在有机溶剂中溶解后加入 Elisa 板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质天然干固在固相表面。第四、应留意以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择，一般选择 ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。
3、常用的包被液除了刚才提到的 pH9.6 碳酸盐缓冲液，还有 pH7.2 的磷酸盐缓冲液和pH7-8 的 Tris-HCL 缓冲液等等。第五、但终极选用什么，要依据试验详细来实践。常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或 1%明胶; 脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰 )和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥 ELISA 试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。第六、在洗板时会有一定误差，人为因素很大(当然有前提的用洗板机除
4、外) ，洗的不彻底或串了孔，对如斯敏捷的 ELISA 系统可是不小的影响。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板：可以说在 ELISA 操纵中，洗涤是最主要的枢纽技术。第七、加抗体标本(和二抗 )：注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用 pbs 稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。第八、显色：显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存 HRP 结合物加硫柳泵，AP 结合物可加叠氮钠。最后，上海恒远生物公司特别说到，每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好分析。咨询订购 Elisa 试剂盒欢迎您联系我公司业务员，品质保证、价格优惠、服务完善的三重优势 ELISA 试剂盒尽在上海恒远！我司 微信公众号：hyelisakit 拿出手机扫一扫：
