荧光原位杂交(FISH)实验步骤页.doc

仪器设备 1、 医用微波炉； 2、 水浴锅； 3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜； 4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。FISH试剂 （1）1PBS：由10PBS溶液稀释而成，储存于4； （2）20SSC（pH7.0）； （3）2SSC，由20SSC溶液稀释而成； （4）25mg/ml蛋白酶K消化液。 （5）变性液(70甲酰胺+2SSC，pH7.0)：4ml 20SSC；8ml蒸馏水；28ml甲酰胺。每次新鲜配制。 （6）杂交后洗涤液： 20SSC 4ml；蒸馏水16ml；甲酰胺20ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。实验步骤 1、脱蜡： 1）二甲苯脱蜡3次，每次5min； 2）100酒精两次，每次2min； 3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。 2、蛋白酶处理: 1）每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2SSC 40m