荧光定量 PCR 方法:探针法 VS 染料法?荧光定量 PCR 又称 qPCR,是一项非常常见的分子生物学实验技术。荧光定量 PCR 荧光为基础对核酸进行定量分析,其应用非常广泛,可以用于检测基因的表达量(RNA 的丰度),验证表达谱芯片或转录组测序的数据,确定病原体的载量,对片段的拷贝数(CNV)进行分析,对基因进行分型等等。大部分研究者主要的应用是对基因的表达量进行测定,其原理为通过监控反应体系中荧光强度的变化,记录检测荧光达到阈值时的循环数(Ct 值)。从理论上说,起始模板量和 Ct 值密切相关,因此我们通过判读 Ct 值从而对样本进行定量。在进行荧光定量 PCR 时,从技术和产品来说,我们往往会有许多选择,尤其是方法的选择,对最终结果的准确性至关重要。荧光定量 PCR 从方法上来说可以分为染料法和探针法两种。 探针法 染料法1、 染料法在国内,染料法一般采用 DNA 染料 SYBRGreen,染
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