苯并咪唑基取代的甾体衍生物合成.DOC

1、Comment jxhg_lcy1: 请补充其简介信息。Comment jxhg_lcy2: 英文作者名称及英文单位名称请给出。格式参照精细化工已发表文章。Comment jxhg_lcy3: 反应路线图中是用 17编的号，请统一。下同。Comment jxhg_lcy4: 所有的 17应该改为 C-17，请全文改正。Comment jxhg_lcy5: 首次出现请同时分别给出其中文全称。下同。Comment jxhg_lcy6: 请补充完整。苯并咪唑基取代的甾体衍生物合成及其抗肿瘤活性甘春芳 1,刘晓兰 1,盛海兵 1,展军颜 1,吴玉兰 1,黄燕敏 1,杨坤2,崔建国 1*(1.广西师范学

2、院北部湾环境演变与资源利用教育部重点实验室,化学与材料科学学院, 广西南宁530001；2.广西万德药业有限公司，广西南宁 530105)摘要：以孕烯醇酮为原料，通过对孕烯醇酮的 C-17支链进行化学修饰，设计合成了 18个甾核的 C-17-支链为苯并咪唑基取代的甾体化合物，通过 IR、 1H NMR、 13C NMR和 HRMS 对化合物进行了结构表征，采用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT) 法测试了这些化合物对人口腔上皮癌细胞(KB )、宫颈癌细胞( HeLa)、人肝癌细胞( HepG)、人鼻咽癌细胞 (CNE-2)、乳腺癌细胞(BT474) 、 卵巢癌细胞(SKOV3)的体外抑制活性。结果表明，

3、部分化合物具有中等程度的活性，其中氟基取代的苯并咪唑甾体化合物 5c和 6c对人体卵巢癌细胞(SKOV3)具有良好的选择性抑制作用， IC50(半抑制浓度) 值分别为(15.43.8)和(9.20.5)mol/L。该类化合物可为设计开发新型抗肿瘤药物提供参考。关键词：苯并咪唑甾体化合物；孕烯醇酮；抗肿瘤活性；细胞毒性中图分类号：-;O626; O629.2; R914Synthesis and Antiproliferative Activities of Some Novel Steroidal Compounds with Benzimidazole GroupsGAN Chun-fang

4、1, LIU Xiao-lan1, SHENG Hai-bing1, ZHAN Jun-yan1, WU Yu-lan1, HUANG Yan-min1, YANG Kun2, CUI Jian-guo1*(1.Key Laboratory of Beibu Gulf Environment Change and Resources Utilization， College of Chemistry and Material Science， Guangxi Teachers Education University， Nanning, 530001， Guangxi, China;2.Gua

5、ngxi wande pharmaceutical co.LTD, Nanning, 530105,Guangxi, China)Abstract: Using pregnenolone as starting material, 16 steroidal derivatives containing benzimidazole heterocycle were designed and synthesized by suitable modification at C17 side chain of pregnenolone, their structures were characteri

6、zed by IR, 1H NMR、 13C NMR and HRMS. The antiproliferative activity of the target compounds in vitro was evaluated against KB, HeLa, HepG, CNE-2, BT474 and SKOV3 cancer cells by MTT method. The results show that some compounds possess distinct antiproliferative activities against tested cells. Among

7、 the active compounds, compound 5c and 6c show better selective activities against SKOV3 cells with IC50 values of 15.43.8 and 9.20.5 mol/L, respectively. The information obtained from the studies may be useful for the design of novel chemotherapeutic drugs.Keywords: benzimidazole; steroid; pregneno

8、lone; antiproliferative activity; cytotoxicity.Foundation items：the National Nature Science Foundation of China (No.: 21762008; 21562007; 21462009); The science and technology research project of The science and technology research project of Guangxi Institution of Higher Education（KY2015ZD077); The

9、 science and technology project of Nanning (No. 20171125-5)基金项目：国家自然科学基金项目(No.: 21762008；21562007；21462009)；广西高校科学技术研究项目 (KY2015ZD077)； 广西南宁市科技专项 (No. 20171125-5)资助项目.作者简介：甘春芳(1973-),女，教授，0771-3908065，。崔建国（1954- ），男，教授，0771-3908065，Comment jxhg_lcy7: 请不要用组合符号，罗马数字中的有专门的符号，请改正，下同。Comment jxhg_lcy8: 其

10、化合物Ia、Ib 、I c、Id 中的 R1和 R2所代表的基团怎么是一样的？有错误，请核对。Comment jxhg_lcy9: 首次出现请同时分别给出其中文全称。Comment jxhg_lcy10: 请对甾体结构中的碳进行编号。苯并咪唑杂环基团含有两个氮原子，可与生物体内的酶和受体形成氢键，是一类重要的药效基团 1。以苯并咪唑环构筑的化合物具有广泛的生物活性，常作为有机合成反应中间体，在医药方面具有广泛用途，如作为组胺受体拮抗剂和质子泵抑制剂，具有抗高血压、抗病毒、抗菌、抗真菌、抗癌、镇痛等作用 2-8, 是目前医药研发中极为活跃的领域之一。含有苯并咪唑结构片段的化合物具有较好的抗肿瘤活

11、性，如，双苯并咪唑 Ia和Ib（结构如下所示）可作为 DNA拓扑异构酶(Topo)抑制剂, 对乳腺癌和前列腺癌具有强烈的抑制作用，其碘代物同样具有较好的抑制活性。化合物对乳腺癌和肺癌具有良好的抑制效果。化合物a 是一种有效的 DNA修复多聚酶抑制剂，可作为放疗和特定类型化疗的耐药修饰剂。其 2-芳基的对位被取代后得到的化合物b 和c，抑制活性相差不大, 但代谢稳定性和水溶解性更好, 对人体结肠直肠癌细胞株具有良好的抑制活性，作为抗癌药物具有可开发的应用前景 9-10。NN NHN OR1R2aR1=C2H5 R2=HcR1=C2H5 R2=I bR1=H R2=HdR1=H R2=I1 NHN

12、 RRaR=OCH3bR=O(CH2)3N(CH3)2NHN RCONH2aR=HbR=CH2N(CH3)2cR= N双苯并咪唑化合物 I 双苯并咪唑化合物 DNA修复多聚酶抑制剂甾体类化合物对细胞及人体组织具有高度的渗透能力，对细胞核及细胞膜有一定的结合能力，对甾体化合物进行结构改造，有可能获得治疗人类疾病的药物。一些含有杂环结构的化合物具有良好的抗肿瘤活性 11-18，Rafat M等以孕烯醇酮为原料，合成了 C-17支链上含有吡唑苯环结构的孕烯醇酮衍生物，这些化合物对人体肿瘤细胞 MCF-7(乳腺癌)、NCI-H460(肺癌细胞)、SF-268( 人神经癌细胞) 均有极好的细胞毒活性 1

13、9。Banday A H等合成的系列支链杂环取代的甾体化合物（结构如下所示）对结肠癌、肺癌以及乳腺癌细胞具有较强的体外抑制作用 20。文献中报道了一些具有 C-17-双键的 C-17-唑类甾体化合物及 C-17-苯并唑类甾体化合物的合成，其中某些化合物对前列腺癌具有很好的体外抑制生长增殖作用，并且对雄性激素 17-羟化酶也有很好的体外抑制作用 21-23。此外，某些具有C-17-杂环甾体结构的药物已用于临床治疗，如治疗前列腺癌(CRPC)患者的甾体药物醋酸阿比特龙(Abiraterone) （结构如下所示） 。N RHOOF F OOMeOMeab cd ef gh iR=123 567891

14、0112131415161718194 醋酸阿比特龙OONComment jxhg_lcy11: 均为市售吗？请明确。近年来，本课题组一直从事甾体杂环化合物的抗肿瘤活性研究，前期研究结果表明，当将苯并咪唑药效基团引入 B-降胆甾醇结构时，所得到的化合物具有很好的体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性 24。此外，将一些杂环基团引入甾核的 C-17-支链时，部分化合物也表现出良好的体外抑制肿瘤生长增殖活性 25。作为研究工作的延伸，我们以孕烯醇酮为原料，经过卤仿反应，二氯亚砜酰化，然后在甾核的 C-17-位引入具有不同取代基结构的苯并咪唑基团，合成了 18个新的含苯并咪唑杂环的孕烯醇酮衍生物，并采用 MT

15、T法对这些化合物进行体外抑制肿瘤细胞生长增殖筛选，以期为抗肿瘤药物的研发提供理论参考。合成路线如下所示:K2CO3、 EtOH、 、 、 SOCl2H2NH2N R1R2、 、 、 、 、 、a: c: d:e: f: g: h:R1=H; R2=H; R3=H R1=H; R2=Cl; R3=H R1=H; R2=F; R3=H R1=H; R2=OCH3; R3=HR1=H; R2=CH3; R3=H R1=H; R2=CF3; R3=HR1=H; R2=CH3; R3=CH3 R1=Br; R2=CH3; R3=Hb:i:R1=CH3; R2=CH3; R3=HHOOPy,(Ac)2OA

16、cOOBr2,NaOHAcOOOHAcONHNR1R2HONHNR1R21 2 35a-5i 6a-6iR3 R3R3AcOOCl413 518 19 1217 34567891 实验部分1.1 仪器与试剂孕烯醇酮、邻苯二胺、4-氯邻苯二胺、 4-氟-1,2-苯二胺、4-甲氧基邻苯二胺、4- 甲基邻苯二胺、4- 三氟甲基-1,2- 苯二胺、 3,4-二甲基邻苯二胺、5- 溴-3- 甲基苯-1,2-二胺、4,5-二甲基-1,2-苯二胺均购于百灵威科技有限公司；合成所用试剂 均为市售分析纯试剂，溶剂使用前经干燥处理。熔点测定采用 X6显微熔点测定仪，温度计未经校正； IR光谱采用美国 Thermo

17、 Scientific Nicolet IS-10傅里叶红外光谱仪测定； 1HNMR和 13C NMR谱采用德国 Bruker AV-300型超导核磁共振仪测定；高分辨质谱采用美国 Agilent 6210 TOFMS 质谱仪测定；细胞增殖活性评估采用 MTT方法，使用 MLLTISKAN MK3分光仪(Thermo Scientific, Shanghai, China)测定。RPMI 1640培养基 (HyClone公司)、MTT(Sigma 公司) 、胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司) 、青霉素-链霉素溶液(100X) (Beyotime公司)、胰酶(Sigma 公司)、DMSO(Am

18、resco 公司)。细胞增殖评估利用 MTT方法采用 Thermo Scientific 公司MLLTISKAN MK3酶标仪测定。肿瘤细胞株: KB、HeLa、HepG、CNE-2 、BT474、SKOV3。阳性对照: 顺铂(Cisplatin) 。Comment jxhg_lcy12: TLC所用溶剂组成和体积比请给出，下同。Comment jxhg_lcy13: 柱层析所用溶剂种类及体积比信息请给出。下同。Comment jxhg_lcy14: 表示范围时，左边应该是较小的数，右边应该是较大的数，请改正，下同。1.2 实验方法1.2.1化合物 23 的合成化合物 2和化合物 3的合成参考

19、文献26-29，其中化合物 2为白色固体，产率：90.2% ，m.p. 146148( 文献值 26 : 149151)；化合物 3为白色固体，产率：64.4% ，m.p. 256258。1.2. 2 (3-乙酰氧基 -17-孕甾烷基 )苯并咪唑类化合物 (5a5i)的合成向干燥的 50mL茄形瓶中加入 65 mg (0.18 mmol) 化合物 3和 2.2 mL的二氯亚砜，在70的油浴中回流 2.5 h，当溶液由无色变为黄色，停止反应，减压除去多余的二氯亚砜得到化合物 4，化合物 4不经提纯直接进入下一步反应。另取干燥的 100 mL圆底烧瓶，加入 0.39 mmol邻苯二胺或不同取代的邻

20、苯二胺，再加入 1.0 mL三乙胺，然后将化合物 4溶解于 3.0 mL无水甲苯, 室温时，利用恒压漏斗慢慢将化合物 4的甲苯溶液滴加到邻苯二胺中进行搅拌反应，当溶液变成橘黄色时，控制滴速，滴完有大量固体生成。然后于 105的油浴中回流反应，TLC 跟踪至无原料点后终止反应（流动相：V（乙酸乙酯） : V（石油醚） = 1 ：1） 。减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离得到目标产物 5a5i（流动相： V（乙酸乙酯） : V（石油醚） = 1 ：1） 。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基) 苯并咪唑（5a） ，白色固体，产率 33.4%. m.p. 106108; 1H NMR (CDCl3，300

21、 MHz)，: 0.82 (s, 3H, 18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), 2.04 (s, 3H, 3-CH3CO), 4.584.68 (m, 1H, C3-H), 5.41 (d, J=4.8, 1H, C6-H), 6.80 (d, J=7.5, 2H, PhH), 7.05 (t, J=7.5, 1H, PhH), 7.167.19 (m, 1H, PhH), 7.18 (s, 1H, -NH); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.32 (18-C), 19.30 (19-C), 21.01 (11-CH3CO), 21.40 (

22、3- CH3CO), 23.83 (15-C), 24.58 (16-C), 27.73 (2-C), 31.80 (8-C), 31.92 (7-C), 36.67 (1-C), 37.05 (10-C), 38.07 (4-C), 38.67 (12-C), 44.21 (17-C), 50.00 (9-C), 56.46 (13-C), 57.51 (14-C), 73.84 (3-C), 122.3 (6-C), 118.2、119.4、124.8、125.2、126.9、139.7 (苯并咪唑-C), 140.8 (5-C), 170.6 (2-C), 171.6 (3-OCOCH3

23、); IR (KBr) /cm-1: 3345, 2938, 2847, 1730, 1649, 1627, 1375, 1251, 1030, 743; HREIMS m/Z: 433.2843 M+H+ (calcd for C28H37N2O2, 433.2855)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-氯苯并咪唑 (5b)，淡黄色固体, 产率 34.7%. m.p. 98100; 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) : 0.82 (s, 3H, 18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), 2.05 (s, 3H, 3-OCOCH3), 4.584.6

24、8 (m, 1H, C3-H), 5.40 (d, J =4.50, 1H, C6-H), 6.76 (dd, J = 8.4, 2.1, 1H, 6-苯并咪唑-H), 6.81 (d, J = 2.1, 1H, 4-苯并咪唑-H), 6.98 (s, 1H, NH), 7.10 (d, J = 8.4, 1H, 7-苯并咪唑H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.33 (18-C), 19.30 (19-C), 21.00 (11-C), 21.40 (3-CH3CO), 23.82 (15-C), 24.55 (16-C), 27.73 (2-C), 29.69

25、 (8-C), 31.93 (7-C), 36.66 (1-C), 37.04 (10-C), 38.07 (4-C), 38.67 (12-C), 44.21 (17-C), 50.00 (9-C), 56.46 (13-C), 57.51 (14-C), 73.84 (3-C), 117.76 (4-C), 119.21 (7-C), 122.27 (6-C), 123.16 (6-C), 126.26 (5-C), 132.13 (9-C), 139.71 (8-C), 142.12 (5-C), 170.59 (2-C), 171.66 (3-OCOCH3); IR(KBr) /cm-

26、1: 3343, 2933, 2849, 1730, 1663, 1373, 1246, 1035, 803; HREIMS, m/Z: 467.2460 M+H+ (calcd for C38H36ClN2O2, 467.2456)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-氟苯并咪唑(5c)，淡黄色固体, 产率 53.6%. m.p.123125; 1HNMR (CDCl3，300 MHz) : 0.80 (s, 3H 18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), Comment jxhg_lcy15: 上标代表什么意思？请解释。表示的是 C-F的 J2耦合。2.03 (

27、s, 3H, 3-OCOCH3), 4.564.67 (m, 1H, C3-H), 5.40 (d, J = 4.50, 1H, C6-H), 6.506.41 (m, 1H, 6-苯并咪唑 -H), 7.057.01 (m, 1H, 7-苯并咪唑-H), 7.17 (d, JF-H = 14.4, 1H, 4-苯并咪唑-H); 13C NMR(75MHz, DMSO-d6) : 13.37 (18-C), 19.29 (19-C), 21.01 (11-C), 21.39 (3-CH3CO), 23.85 (15-C), 24.57 (16-C), 27.72 (2-C), 31.79 (8

28、-C), 31.92 (7-C), 36.66 (1-C), 37.07 (10-C), 38.06 (4-C), 38.60 (12-C), 44.19 (17-C), 50.02 (9-C), 56.44 (13-C), 57.23 (14-C), 73.91 (3-C), 104.20 (2JC-F = 25.1, 4-C), 105.47 (2JC-F = 22.7, 6-C), 122.30 (6-C), 127.14 (3JC-F = 9.9, 7-C), 129.02 (9-C), 139.70 (5-C), 143.29 (3JC-F = 43.8, 8-C), 161.77

29、(JC-F = 242.0, 5-C), 170.69 (2-C), 171.90 (3-OCOCH3); IR (KBr) /cm-1: 3350, 2938, 2844, 1718, 1375, 1658, 1605, 1251,1028, 841; HREIMS m/Z: 451.2766 M+H+ (calcd for C28H36FN2O2, 451.2761)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-甲氧基苯并咪唑 (5d)，白色固体, 产率 60.53%，m.p. 9698; 1H NMR (CDCl3, 300 MHz) : 0.79 (s, 3H, 18-CH3), 1.

30、03 (s, 3H, 19-CH3), 2.02 (s, 3H, 3-OCOCH3), 3.74 (s, 3H, 5-OCH3), 4.574.63 (m, 1H, C3-H), 5.38 (d, J =2.4, 1H, C6-H), 6.32 (s, 1H, 4-苯并咪唑 -H), 6.94 (d, 1H, 6-苯并咪唑-H), 6.96 (d, J = 4.5, 1H, 7-苯并咪唑-H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.50 (18-C), 19.45 (19-C), 21.13 (11-C), 21.57 (3-CH3CO), 23.96 (15-C),

31、24.71 (16-C), 27.85 (2-C), 31.93 (8-C), 32.05 (7-C), 36.79 (1-C), 37.16 (10-C), 38.19 (4-C), 38.75 (12-C), 44.27 (17-C), 50.12 (9-C), 56.6 (13-C), 57.42 (14-C), 74.01 (3-C), 103.15 (4-C), 104.83 (6-C), 117.65 (7-C), 122.47 (6-C), 127.03 (9-C), 139.81 (5-C), 142.97 (8-C), 159.10 (5-C), 170.80 (2-C),

32、171.94 (3-OCOCH3); IR (KBr) /cm-1: 3413, 2930, 2857, 1716, 1621, 1516, 1030, 966, 843, 791; HREIMS m/Z: 463.2954 M+H+ (calcd for C29H39N2O3, 463.2961)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-甲基苯并咪唑 (5e)，白色固体, 产率 52.6%. m.p. 132134; 1H NMR (CDCl3，300 MHz) : 0.80 (s, 3H, 18-CH3), 1.04 (s, 3H, 19-CH3), 2.03 (s, 3H, 3-OC

33、OCH3), 2.25 (s, 3H, 5-CH3), 4.534.70 (m, 1H, C3-H), 5.40 (d, J =3.6, 1H, C6-H), 6.58 (d, J =7.8, 1H, 6-苯并咪唑-H), 7.00 (d, J =7.8, 1H, 7-苯并咪唑-H), 7.20 (s, 1H, 4-苯并咪唑-H); 13C NMR (75MHz,DMSO-d6) : 13.32 (18-C), 19.30 (19-C), 20.45 (5-CH3), 21.00 (3-CH3CO), 21.40 (11-C), 23.84 (15-C), 24.59 (16-C), 27.7

34、3 (2-C), 31.82 (8-C), 31.92 (7-C), 36.66 (1-C), 37.06 (10-C), 38.07 (4-C), 38.52 (12-C), 44.15 (17-C), 50.03 (9-C), 56.42 (13-C), 57.29 (14-C), 73.91 (3-C),118.63 (7-C), 120.05 (4-C), 122.06 (6-C), 122.33 (6-C), 125.31 (5-C), 136.89 (8-C), 139.71 (9-C), 140.93 (5-C), 170.65 (2-C), 171.61 (3-OCOCH3);

35、 IR (KBr) /cm-1: 3339, 2925, 2850, 1733, 1654, 1369, 1260, 1030,794; HREIMS m/Z: 447.3039 M+H+ (calcd for C29H39N2O2, 447.3012)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-三氟甲基苯并咪唑 (5f)，白色固体, 产率 53.2%，m.p. 112115; 1H NMR (CDCl3，300 MHz) : 0.82 (s, 3H, 18-CH3), 1.06 (s, 3H, 19-CH3), 2.03 (s, 3H, 3-OCOCH3), 4.584.68 (m, 1H

36、, C3-H), 5.41 (d, J = 4.8, 1H, C6-H), 6.83 (d, J = 8.4, 1H, 7-苯并咪唑 -H), 7.33 (d, J = 8.4, 1H, 6-苯并咪唑-H), 7.40 (s, 1H, 4-苯并咪唑-H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.39 (18-C), 19.28 (19-C), 21.01 (11-C), 21.36 (3-CH3CO), 23.87 (15-C), 24.57 (16-C), 27.70 (2-C), 31.79 (8-C), 31.94 (7-C), 36.68 (1-C), 37.08

37、 (10-C), 38.05 (4-C), 38.62 (12-C), 44.30 (17-C), 50.00 (9-C), 56.47 (13-C), 57.35 (14-C), 73.95 (3-C), 117.51 (4-C), 120.73 (7-C), 122.28 (6-C), 122.57 (5-CF3), 122.88 (6-C), 123.88 (5-C), 126.16 (8-C), 139.73 (5-C), 144.44 (9-C), 170.80 (2-C), 171.95 (C=O); IR (KBr) /cm-1: 3351, 2937, 2903, 1716,

38、1324, 1110, 1075, 891, 624; HREIMS m/Z: 501.2713 M+H+ (calcd for C29H36F3N2O2, 501.2729)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-4,5-二甲基苯并咪唑 (5g)，白色固体, 产率 68.1%，m.p. 120123; 1H NMR (CDCl3，300 MHz) : 0.81 (s, 3H, 18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), 2.04 (s, 3H, 3-CH3CO), 2.11 (s, 3H, 4-CH3), 2.26 (s, 3H, 5-CH3), 4.574.68 (m,

39、 1H, C3-H), 5.40 (d, J = 1.5, 1H, C6-H), 6.62 (d, J = 8.1, 1H, 6-苯并咪唑-H), 6.93 (d, J = 8.1, 1H, 7-苯并咪唑-H), 7.09 (s, 1H, N-H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.34 (4-C), 13.38 (18-CH3), 19.31 (19-C), 20.55 (5-CH3), 21.01 (11-C), 21.43 (3-CH3CO), 23.81 (15-C), 24.59 (16-C), 27.73 (2-C), 31.81 (8-C), 31.9

40、2 (7-C), 36.66 (1-C), 37.04 (10-C), 38.07 (4-C), 38.59 (12-C), 44.14 (17-C), 50.02 (9-C), 56.43 (13-C), 57.35 (14-C), 73.89 (3-C), 120.48 (7-C), 122.21 (6-C), 122.34 (4-C), 122.70 (6-C), 122.80 (8-C), 135.09 (5-C), 139.49 (9-C), 139.69 (5-C), 170.64 (2-C), 171.75 (C=O); IR (KBr) /cm-1: 3361, 2935, 2

41、900, 1733, 1509, 1369, 1242, 1035, 786, 729; HREIMS m/Z: 461.3164 M+H+ (calcd for C30H40N2O2, 461.3168)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5-甲基-6-溴苯并咪唑 (5h)，淡黄色固体, 产率 11.6%, m.p. 105107; 1H NMR (CDCl3，300 MHz) : 0.80 (s, 3H,18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), 2.04 (s, 3H, 3-OCOCH3), 2.19 (s, 3H, 5-CH3), 4.574.66 (m, 1H

42、, C3-H), 5.40 (d, J = 4.5, 1H, C6-H), 6.79 (s, 1H, N-H), 7.10 (s, 1H, C4-H), 7.25 (s, 1H, C7-H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.39 (18-C), 17.64 (5-CH3), 19.30 (19-C), 21.00 (11-C), 21.41 (3-CH3CO), 23.81 (15-C), 24.58 (16-C), 27.72 (2-C), 29.69 (8-C), 31.92 (7-C), 36.66 (1-C), 37.05 (10-C), 38.06 (4

43、-C), 38.58 (12-C), 44.25 (17-C), 49.99 (9-C), 56.43 (13-C), 58.43 (14-C), 73.92 (3-C), 109.9 (7-C), 122.3 (6-C), 125.40 (6-C), 125.89 (4-C), 126.52 (8-C), 130.66 (5-C), 138.47 (9-C), 139.70 (5-C), 170.74 (2-C), 171.85 (3-OCOCH3); IR (KBr) /cm-1: 2937, 2867,1786, 1726, 1589, 1372, 1115, 1030, 901, 79

44、4; HREIMS m/Z: 525.2101 M+H+ (calcd for C29H37BrN2O2, 525.2117)。2-(3-乙酰氧基-17- 孕甾烷基)-5,6-二甲基苯并咪唑 (5i)，淡黄色固体, 产率 11.5%, m.p. 108110; 1HNMR (CDCl3， 300 MHz) : 0.81 (s, 3H, 18-CH3), 1.05 (s, 3H, 19-CH3), 2.05 (s, 3H, 3-CH3CO), 2.15 (s, 3H, 5-CH3), 2.17 (s, 3H, 6-CH3), 4.574.68 (m, 1H, C3-H), 5.40 (d, J

45、= 4.8, 1H, C6-H), 6.61 (s, 1H, 3-H), 6.94 (s, 1H, 6-H), 7.07 (s, 1H, N-H); 13C NMR (75MHz, DMSO-d6) : 13.30 (18-C), 18.74 (19-CH3), 19.31 (6-CH3), 19.31 (5-CH3), 21.02 (11-C), 21.41 (3-CH3CO), 23.83 (15-C), 24.58 (16-C), 27.74 (2-C), 31.81 (8-C), 31.93 (7-C), 36.66 (1-C), 37.05 (10-C), 38.08 (4-C),

46、38.57 (12-C), 44.12 (17-C), 50.03 (9-C), 56.43 (13-C), 57.41 (14-C), 73.88 (3-C), 119.72 (7-C), 122.33 (4-C), 122.40 (6-C), 126.03 (8-C), 127.56 (9-C), 135.22 (6-C), 138.30 (5-C), 139.71 (5-C), 170.60 (2-C), 171.39 (3-OCOCH3); IR (KBr) /cm-1: 3438, 2930, 2855, 1663, 1731, 1521, 1379, 1025, 871, 796;

47、 HREIMS m/Z: 461.3170 M+H+ (calcd for C30H40N2O2, 461.3168)。1.2.3 2(3-羟基 -17-孕甾烷基)苯并咪唑类化合物 (6a-6i)的合成称取 0.16mmol 化合物 5 放入圆底烧瓶中，加入 0.1 mol. L-1 K2CO3 水溶液 1 mL 和甲醇 5 mL，常温搅拌反应 2.5 h, TLC 跟踪，至无原料点后终止反应（流动相： V（乙酸乙酯） : V（石油醚） = 1：1） 。将反应物减压蒸去溶剂，然后加入 10mL 蒸馏水，再用二氯甲烷分 3 次萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水 Na2SO4 干燥，滤液减压除去溶剂得白色固体, 进一步柱层析分离得到目标产物 6a6i（流动相：V（乙酸乙酯）:V（石油醚）= 1：1） 。2-(3-羟基-17-孕甾烷基)苯并咪唑 (6a), 白色固体, 产率 89.6%，m.p.124126 ; 1H NMR (CDCl3， 300 MHz) : 0.83 (s, 3H, 18-CH3), 1.04 (s, 3H, 19-CH3), 3.503.60 (m, 1H, C3-H), 3.89 (br s, 1H, 3-OH), 5.38 (d, J = 4.8, 1H, C6-H), 6.82 (d, J = 7.5, 2H, C5-H and C6-H), 7