精选优质文档-倾情为你奉上质粒转化流程：（以下操作如无特别说明均在超净台中操作）1. 取一管感受态细胞，待感受态细胞在冰上融化后，取1l质粒DNA或20l连接产物与之混合(质粒DNA的用量不超过50ng)，冰浴30min。2. 42水浴90s。3. 冰浴5min。4. 加入800l不含抗生素的LB液体培养基，于37摇床培养45min。5. 5000rpm离心3min，吸去800l上清。6. 将剩余200ul菌液重悬，加入倒有含抗生素的LB固体培养基平板上，用涂布棒涂均匀。7. 正置数分钟，待菌液稍干，放入37培养箱中倒置培养，12-16个小时后可观察到菌落形成。8. 第二天上午挑取单菌落于1ml含有抗生素的LB液体培养基中37摇菌。9. 晚上将摇起来的菌株每管加入500ul 50%无菌甘油，于-70中冻存。注：可做一组阴性对照，即用无菌水取代质粒，与感受态细胞混合，其余操作相同，平板上应无法长出菌落。连接产物的转化应设一组用线性化载体的阴性对照和空载体的阳性对照。专心-专注-专业
