蓝白斑筛选原理及问题总结(共2页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上 蓝白斑筛选原理及问题总结1 问题:做转化时,用蓝白斑筛选,以获得阳性克隆。那它和直接利用AMP抗性,而不用蓝白斑筛选,有什么区别吗?蓝白斑筛选有什么作用吗?对于这一问题,我想,抗性筛选是防止杂菌生长。理论上说,当培养基中含有抗生素时,只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖。蓝白筛选是验证是否有插入片断。两者结合起来,更有利于筛选到我们的目的菌。2 问题:如果加了AMP、IPTG和X-Gal,长出来的白斑一定都是含有插入片段的吗?有没有可能是载体自连的?答:可以说,世界上没有绝对的事情,即使加了AMP、IPTG和X-Gal,长出来的白斑也不一定都是含有插入片段的阳性克隆,具体原因可能有:1)有可能是载体自连的假阳性;2)作时AMP、IPTG和X-Gal其中一种或几种没涂均匀。3)有时即使插入片段也会出现篮斑。只要编码框没被破坏。3 问题:如何筛选重组菌落? 答:可使用蓝/白斑筛选法,在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上,重组菌株为白色,未转入重组质粒的菌株为蓝色。 4 问题:蓝白斑筛选如何筛选合适的宿主

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