1、分子生物学部分开发实验植物遗传亲缘关系研究实验目的运用 PCR-RAPD 分子标记技术，对不同种植物的基因组 DNA进行 PCR扩增，获得指纹图谱。同时运用统计分析方法，计算不同物种的遗传距离，得出物种间的亲缘关系。实验材料w植物样品 : w花椰菜 1，花椰菜 2，花椰菜 3实验试剂及仪器w 10buffer: 500mM KClw 100mM Tris-HCl (pH9.0)w 0.1% 明胶w 1% TritonX-100w MgCl2 2.5mMw dNTP: 1mMw 引物： 3种 RAPD引物 5.0uMw 模板： 20ng/lw Taq酶： 5u/lw PCR仪，凝胶成像系统，电泳
2、系统实验方法 w 向无菌的 500l Eppendorf管中依次加入以下溶液。w 反应物 体积 w 10buffer 2.5l w 4dNTP(1mM) 2.5l w MgCl2 (25mM) 2.5lw 无菌水 10.5lw Taq酶 (1U/ul) 1lw 引物 2l w 模板 DNA(20ng) 4l w 总体积 25lw 2反应体系混匀，离心w 3在仪上按以下方式循环w 94 变性 分钟w 36 退火 分钟w 72 延伸 分钟w 经过 40个循环w 4 延伸反应 7分钟。w 5取 20l反应液加 4l Loading buffer在w 6. 1.5琼脂糖凝胶上 120伏，电泳 2小时。w 7. 在凝胶成像系统上观察记录实验结 根据 RAPD扩增结果计算 :1.遗传相似性系数 S S = 2 Nxy / (Nx + Ny) Nxy为种间共有的扩增带， Nx为 X种具有的扩增带， Ny为Y种具有的扩增带2.遗传距离（ D）D = 1 S结果分析
