分光光度法-生化实验(共6页).doc

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资源描述

精选优质文档-倾情为你奉上常用生化实验技术:分光光度法 有色溶液对光线有选择性的吸收作用,不同物质由于其分子结构不同,对不同波长光线的吸收能力也不同,因此,每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液,虽对可见光无吸收作用,但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。分光光度法主要是指利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术,其理论依据是Lambert和Beer定律。分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。比色法用的单色光通过滤光片产生,谱带宽度为40120nm,精度不高,而分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过35nm,在紫外光区可到l nm以下。单色光通过棱镜或产生,具有较高的精度。一、光的基本知识光是由光量子组成的,具有二重性,即不连续的微粒性和连续的波动性。波长和频率是光的波动性的特征,可用下式表示:C式中为波长,具有相同的振动相位的相邻两点间的距离叫波长。为频率,即每秒钟振动次数。c为光速,等于299 7704kms。光属于电磁波。自然界中

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