基因工程实验教学教案(共11页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上基因工程实验教学方案湖南人文科技学院生命科学系生物技术教研室指导教师：吴娟实验一 重组质粒的提取及转化表达型菌株 质粒DNA的提取实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的技术与方法。实验原理1碱变性法基本原理是，在Ph12.0-12.6碱性环境中，线性的大分子量细菌染色体DNA变性，而共价闭环质粒DNA仍为自然状态。将PH调至中性并有高盐浓度存在的条件下，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构大部分DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍为可溶状态，通过离心可除去大部分细胞碎片，染色体DNA，RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，再用酚氯仿或硅基质膜柱子进一步纯化DNA。2设计构建体外重组DNA分子构建体外重组DNA分子，首先要了解目的基因的酶切图谱。选用的限制性内切酶不能在目的基因内部有识别位点，也就是说用一种或两种限制性内切酶就能切割得到完整的外源D