精选优质文档-倾情为你奉上PCR引物设计原则引物(Primer)是人工合成的两段寡核苷酸序列。1、 引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、 G十C含量：应在40%-60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5-10度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4(G十C)十2(A十T)。3、 碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发.4、 引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构.5、 引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3端的互补重叠。引物3端最好选T，错配的几率与A相比大大的降低了。G、C之间错配的概率小于A、T.6、引物的5端可以修饰，而3端不能进行修饰。5端的修饰包括：加酶切位点，标记生物素，荧光，地高辛、Eu3+等，引入蛋
