精选优质文档-倾情为你奉上TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法细胞凋亡中染色体的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 的染色体在Ca 和Mg 依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180200bp核小体多聚体。双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列的3-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到的3-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法一般称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有的断裂，因而没有3-OH形成，很少能够被染色。低分子量的分离后，也可使用聚合酶进行缺口翻译（nick translation），使低分子量的标记或染色，然后分析凋亡细胞。TUNEL或缺口翻译法实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征，
