精选优质文档-倾情为你奉上大肠杆菌的保存和培养1菌种的保存菌种的保存通常采用甘油低温保存法1.1基本原理：在-70或液氮中冻存，细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。在0-70温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌的严重损伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔。因此，为了避免0-70冰晶的形成和细菌膜两侧离子平衡的破坏，需要加保护剂。甘油可降低冰点，在缓慢的冻结条件下，能使细菌内水分在冻结前透出细菌外。贮存在-70以下低温中能减少冰晶形成，甘油对细菌无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细菌。1.2使用浓度范围为15%-50%，一般常用30%。在保存瓶中按1：1加入60%的甘油和菌液，混匀后液氮速冻，然后放入-70度超低温冰箱贮存。2菌种的复苏 复苏菌种时，用接种环或牙签挑取少许冻结的菌种到平皿上，37培养8-12小时即可。甘油菌从冰箱取出使用时应置于低温或 0冰浴中，用完尽快放回，接种时挑取表面已融化部分即可，不可全溶，因反复冻融会导致细胞壁破裂。切记：接种过程中不得使保存瓶中的菌液融化。
