1、毕业论文 文献综述 生物 技术 浙贝母生物碱的研究进展 摘要 ： 浙贝母是百合科贝母属多年生草本植物，是贝母中产量大、种植面积广的一个品种。贝母是以鳞茎入药，具有清热润肺、止咳化痰等作用 1。浙贝母的主要成分是具有生物活性的生物碱，本文对浙贝母生物碱的化学成分、 药用价值 ，浙贝母生物碱的提取方法以及测定生物碱含量的方法进行阐述。 关键字： 化学成分；药用价值；提取方法；含量测定 ； 浙贝母生物碱是一类具有生物活性的甾体生物碱，是浙贝母的次生代谢产物。浙贝母的是国内外畅销的天然中草药，其主要产地是在宁波鄞州县，在 浙江其他地方也有种植。浙贝味苦性寒，有清热化痰、散结解毒之效，开泄力强，长于清火
2、散结，临床多用于炎性、痰热郁肺咳嗽，也常用于痈毒肿痛、瘰疬未溃之 症 。随着其作用的不断发现，浙贝母的药用价值不断被人们所重视。浙贝母生物碱种类多，主要的化学成分是浙贝甲素，浙贝母乙素。浙贝母是天然的药用植物，具有很高的研究意义。 1 浙贝母的概况 1.1 浙贝母的化学成分 浙贝母是百合科贝母属植物的干燥鳞茎的一种，其主要的生物活性成分是生物碱。大多数生物碱属于甾体生物碱类。浙贝母的化学研究开始于 1923 年， Kaneko 等研究了浙贝 母地上茎叶的化学成分，分离出 baimonidine（贝母尼定碱）、 isobaimonidine（异贝母尼定碱）、 isoverticine、 frit
3、illarizine、 verticinone、 solanidine、 hapepunine 等 8 种生物碱 2，另外还有一种化合物 V,叫 petilidine3。 1994 年严铭铭等人又分离其他 6 种化合物分别是丁香脂素、 2,5-二甲基苯醌、 -谷甾醇、浙贝甲素、浙贝乙素、茄啶 4。至今在浙贝母中发现了除以上生物碱外，还有浙贝宁、浙贝丙素、浙贝酮、浙贝宁甙、苦鬼臼毒素 等生物碱 5。浙贝母中主要的是浙贝母甲素和浙贝乙素。图 1 为浙贝母西藜芦碱母核的结构。图 2 为浙贝甲素结构；图 3 为浙贝乙素的结构 6 。 图 1 西藜芦碱母核 图 2 浙贝甲素 图 3 浙贝乙素 1.2 浙
4、贝母的药用价值 浙贝母在 20 世纪 90 年代，人们对其药理作用进行了较为深入的研究。浙贝母一般的功效是清热化痰、开郁散结的功效。人们通过对小鼠服用氨水引咳，然后注入浙贝乙素，浙贝甲素，发现了浙贝母具有镇咳、祛痰 、松弛平滑肌等的作用 7。有报道给狗注射大剂量的浙贝甲素、浙贝乙素和贝母新碱都可以起到降压的作用 8。浙贝母水提物和醇提物对 6 株幽门螺杆菌有抑制作用，最低抑菌浓度 (MIC)都约为 60g/mL9，浙贝甲素通过抑制细菌细胞细胞膜上主动外排泵，增加耐药金葡萄菌内抗生素的蓄积，发挥逆转细菌耐药作用，能起到抗菌的作用。浙贝母的生物碱还具有逆转肿瘤细胞的作用，肿瘤已经成为医学界的一大难
5、题，至今也没有能治愈的方法。胡凯文经过一系列的药理学实验证明了浙贝母生物碱是一类新的肿瘤细胞多药耐药逆转剂，在体外可以作用于不 同机制的肿瘤耐药细胞系；它的作用机理是降低耐药相关蛋白的表达，增加抗癌药物在肿瘤细胞内的蓄积，但是只有有限的证据表明浙贝母生物碱可以逆转移植性动物肿瘤的耐药性 10； 生物碱 对老年性前列腺癌、泌尿系统肿瘤也有一定的抑制作用 11-12。 浙贝母擅治浅表性胃炎，还能治疗梅尼埃病。 2 浙贝母生物碱的提取方法 浙贝母生物碱的提取方法一般有浸渍法、渗漉法、煎煮法、热回流法，新技术包括酶法、传统提取方法的物理场强化。在中国药典里采用 70%乙醇进行浸渍，在进行超声处理，过滤
6、、用饱和正丁醇萃取得到生物碱 13。此 方法简单、操作容易。戴国友等人对不同溶媒对浙贝母生物碱含量影响进行了研究，分别采用 95%乙醇、 60%乙醇、甲醇、 70%乙醇、水对生物碱进行提取得到 70%乙醇的提取效率最大 14。程显隆等人采用氯仿：甲醇（ 4： 1）的混合溶液进行提取，并进行回流，过滤，此方法能得到较多的生物碱 15。丁春霞等人对浙贝母生物碱的提取工艺进行了优化， 75%的乙醇，结合摇床振荡法得到的生物碱的提取率略高 16。李樱子等人用不同浓度烟酸提取生物碱，发现在0.3%-2.5%盐酸浓度中均能提取到贝母甲、乙的成分。用 0.3% 1.5%盐酸提取时，贝母乙素含量高于贝母素甲，
7、而用 2.0%-2.5%盐酸提取时，贝母素甲高于贝母素乙。因此可以根据实际的需求，采用不同浓度的盐酸提取 17。孙良顺等人对川贝中的生物碱提取工艺进行了优化，从 PH 值、乙醇体积分数、超声时间、料液比 4 个因素进行了正交实验，得出，提取液 PH 值为 1、乙醇体积分数为 50%、超声时间 75min、料液比为 1： 10，为最佳的提取工艺。作者也得出，这些因素对提取率的影响大小顺序为 PH乙醇体积分数 超声分数 .超声时间 料液比 18。这个实验也可以用于浙贝母生物碱的提取。 3 浙贝 母生物碱含量的测定 目前，我国质量控制体系对中药及其制剂的质量控制内容主要包括外观鉴别、性状检查。测含量
8、的较少。利用生物碱的含量可以作为浙贝母质量考察的依据。生物碱含量的测定方法主要有薄层色谱 (TLC)、气相色谱 (GC)、高效液相色谱 (HPLC)及超临界流体色谱 (SFC)等 )、光谱法 (如紫外、红外光谱等 )、核磁共振谱 (NMR)和联用技术 (如GC MS(质谱 )、 LC 一 MS、 LC NMR 和 LC DAD(二极管阵列检测 )一 MS”)。 3.1 紫外 -可见分光光度法 紫外 -可见吸收光谱是由成键原子的分子轨道中电子跃迁 产生的，分子的紫外线吸收和可见光吸收的光谱区域依赖于分子的电子结构。紫外 -可见吸收光谱根据所用的波长范围不同可分为紫外分光光度法和可见分光光度法 2
9、 种，紫外 -可见光区可分为100-200nm 的远紫外光区、 200-400nm 的近紫外光区、 400-800nm 的可见光区 19。浙贝母的生物碱大多数单色性较差，所以选择紫外 -可见分光光度法可以满足需求。 李松林等人利用紫外 -分光光度法在 618nm 处这一特定吸收波长对浙贝母生物碱的 含量进行了测定 20。这对生物碱含量的测定提供了一个简单，快速的测定方法。 3.2 高效 液相法 液相法作为一项古老的色谱技术，是指流动相为液体的色谱技术。高效液相比经典的液相更高效、高速、高灵敏度的液相色谱法。这也是高效液相与其他仪器分析技术相比的最大的优点。高效液相色谱法可分为液 -液分配色谱法
10、、液 -固色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法、离子色谱法和空间排阻色谱法等。其中液 -液色谱又可以分为正相色谱法和方向色谱法。高效液相色谱仪可以分为 4 个系统：液体输送系统、进样系统、分离系统、数据处理系统 21。利用液相色谱法测生物碱含量的方法主要有高效液相法和柱前衍生液相色谱法。马卫成等人用高效液相一 蒸发光散色检测法，以 Hypersil BDS(250 mm6 mm， 5m)为色谱柱；流动相为甲醇 (含 0 05三乙胺 )一水梯度洗脱；流速 1 0 mLmin-1；记录时间 70 min,以蒸发光散色检测器 (ELSD)检测，雾化温度 50 。蒸发温度 55 。氮气流速 1.6 L
11、min-1.w。作者采用 4 个梯度进行洗脱，生物碱的分离效果较好，能较好看到各个色谱峰 22。王玥等人利用柱前衍生化法对市售贝母中贝母乙素的含量进行了测定，他采用贝母生药粉用氨水 -95%乙醇 ( 1 5) 混合液提取 , 柱前用 2, 4-二 硝基苯肼 ( DNPH) 衍生 , 衍生化条件 50 下反应 30 min。分析色谱柱 : Hy persil C18ODS2, 流动相 : CH3CN-100 mmol/ L CH3COONH4 ( 41 59, pH= 5. 0) , 流速为 1. 2 mL/ min。UV 375 nm 检测 23。通过柱前衍生化方法得到的图谱峰清晰，但是有些拖
12、尾现象。柱前衍生化方法要正确选对衍生试剂。曾有人对浙贝母中贝母乙素和甲素也进行了柱前衍生化液相法测定了含量，但选择的衍生剂不同。高效液相法快速 、 用量少 、 灵敏，是现在中药分析 的一个重要的仪器分析技术。 3.3 其他方法 除了紫外 -分光度法和高效液相法测定含量外，还有其他很多方法。例如薄层色谱法。孙国英等人对薄层色谱法和高效液相法对浙贝母药材中贝母素甲含量进行了比较，同一用 2 %氢氧化钠溶液制备的硅胶 G薄层板上 , 以醋酸乙酯 -甲醇 -浓氨 (22 2 5) 放置分层后的上层溶液为展开剂 ,展开 , 取出 , 晾干 , 喷以碘化铋钾试液至斑点显色清晰 , 立即在薄层板上覆盖同样大
13、小的玻璃板 , 周围用胶布固定 , 照薄层色谱法进行扫描 , 波长 : S =525nm , R = 700nm ,进 行薄层色谱扫描 24。通过与高效液相法进行比较得出，薄层色谱法操作繁琐，外界因素对测定结果影响较大，特别是显色时间方面。王冲之等人建立了酸水解 -酸性染料比色法测定贝母类药材中生物碱及生物碱苷含量的方法。陈波等人利用高效液相色谱 -质谱联用分析了贝母生物碱的方法 ,质谱条件用电喷雾离子化正离子采集模式（ ESI+),m/z 范围 ;210-800,毛细管电压为 4kv，萃取电压 4v, 锥孔电压 ,40v 离子源温度 105 ,脱溶剂温度 350 , 脱溶剂气（ N2)260
14、I h-1, 锥孔反吹气 50L h-1 。进人 质谱的流量由三通阀调为 0.2ml Min-1 。贝母甲素、贝母乙素的选择性检测离子分别 m/z 432 和 m/z 430, 内标物盐酸芬氟拉明的选择离子为 m/z 23225。此方法灵敏度高分离能力较强，对于弱紫外的物质测定更适用。 4 结束语 浙贝母生物碱是浙贝母主要的代谢产物，是一类重要的天然化合物，许多中成药都是以生物碱为主要的有效成分，因此生物碱的提取工艺显的非常重要，如何更多，更快的提取生物碱，是一个值得思考的问题。利用高效液相等仪器分析不仅可以对浙贝母生物碱含量进行测定、有利于市场上药材质量的 控制，也为发掘新品种提供了依据。
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