1、毕业论文开题报告 食品科学与工程 根霉与酵母原生质体二次基因改组选育高酶活力菌株研究 1. 课题研究意义及国内外研究现状 酵母菌 (Yeast)是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。可在缺氧环境中生存。目前已知有 1000多种酵母，根据酵母菌产生孢子 (子囊孢子和担孢子 )的能力，可将酵母分成三类：形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过芽殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫 “假酵母 ”。目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸 性的潮湿的含糖环境中，例如，在水果、蔬菜、蜜饯的内部和表面以及在果园土壤中
2、最为常见。而再酿酒中，它也十分重要。而且猫吃了还会胀大，非常的危险。最常提到的是酿酒酵母（也称面包酵母） (Saccharomyces cerevisiae)，自从几千年前人类就用其发酵面包和酒类，在酦酵面包和馒头的过程中面团中会放出二氧化碳。因酵母属于简单的单细胞真核生物，易于培养，且生长迅速，被广泛用于现代生物学研究中。如酿酒酵母作为重要的模式生物，也是遗传学和分子生物学的重要研究材料。酵母菌中含有环状 DNA质粒，可以用来作基因工程 的载体。 根霉 (Rhizopus)是一种好气性真菌，分类学归属于半知菌亚门、曲霉属。 根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间
3、形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存，能长期保持生活力。根霉在自然界分布很广，用途广泛，其淀粉酶活性很强，是酿造工业中常用糖化菌。我国最早利用根霉糖化淀粉（即阿明诺法）生产酒精。根霉能生产延胡索酸、乳酸等有机 酸，还能产生芳香性的酯类物质。根霉亦是转化甾族化合物的重要菌类。与生物技术关系密切的根霉主要有黑根霉、华根霉和米根霉 。 2. 课题研究的主要内容、预期目标和研究方案 主要内容： 1.菌体培养基的制备、灭菌，亲本菌种的杂交。 2.杂交代多
4、个后代菌株进行形态特征分析。 3.杂交代后代 1， 3,5 蛋白酶活力、淀粉酶活力、糖化酶活力、 SDS 电泳。 2.2 预期目标 1.获得酵母、根霉二次融合后代菌株进行形态生理生化分析，了解后代遗传形态 2.获得酵母、根霉二次融合后代菌株进行蛋白酶活力、淀粉酶活力、糖化酶活力、 SDS 电泳，得出数据于各个菌株进行比较。 研究方案： 1 菌种的活化与扩大培养： YPD 培养基活化菌种， PDA 培养基扩大菌种。 1.1 将准备好的菌种在无菌室超净工作台上接种于马铃薯固体培养基上，浇制 2 到 3 个。将接种好的培养基倒置于 30恒温培养箱中黑暗培养 3 5 天。 2 菌落形态特征的观察 2.
5、1 观察平板培养基上菌落蔓延状况、疏松程度，表面湿润或干燥，有无光泽，隆起形状 ,边缘的整齐度、大小、颜色等。 3 菌体形态特征的观察 3.1 显微镜观察菌种的形状及出芽方式。 4 蛋白酶活力测定 :通过透明圈测定法测定菌种蛋 白酶活力的测定。酶活力大小通过 HC 值来评定 HC值 =透明圈直径 /菌落直径。 5 淀粉酶活力测定 :通过透明圈测定法测定菌种淀粉酶活力的测定 . 酶活力大小通过 HC值来评定 HC值 =透明圈直径 /菌落直径。 6 SDS 电泳：通过 SDS 电泳测定蛋白质种类和蛋白质分子量。 制胶板的安装（短玻璃面朝内），要求密封，以免胶液泄漏。配制适量（如 7.5ml）的一定
6、浓度的分离胶，将配制好的分离胶加入制胶槽中，注意应随着边缘缓慢加入，千万别进气泡。凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5cm 或距梳子齿 0.5cm 处。轻轻在分离胶溶液上覆 盖一层双蒸水封胶，使凝胶表面变得平整，静放 30min1 小时，使凝胶聚合。除去上面的水层，再用滤纸吸尽残留的液体。配制 5%的浓缩胶（ 3ml）迅速将配制好的浓缩胶添加到分离胶表面，并将梳子插入凝胶内，至梳子齿的底部与前玻璃板的顶部平齐，小心避免混入气泡。将凝胶垂直放置于室温下，约 30min 凝胶聚合。凝胶聚合后，即可进行电泳。电泳、染色和脱色。 课题进度计划 2009 年 9 月 2009 年 10 月 文献检索，收集
7、资料，完成开题报告 2009 年 10 月 2009 年 11 月 菌丝的培养及提取 2009 年 11 月 2010 年 2 月 进行蛋白酶、淀粉酶、 SDS 电泳的实验 2010 年 3 月 2010 年 4 月 毕业论文的初稿 2010 年 5 月 完成毕业论文 4. 参考文献 1 Hopwood D A , Wright H M. Genetic recombination through protoplast fusion in Streptomyces J. J Gen Microbiol , 1979, 111(1): 137-143. 2 梁平彦 ,刘宏迪 .展青霉和产黄 青霉
8、的种间体细胞杂交 J.微生物学报 ,1982,22(3):248-256. 3彭帮柱，岳田利，袁亚宏等 .酵母菌原生质体融合技术 J西北农业学报， 2004， 13（ 1）： 101-103 4王燕 .热 -紫外灭活双亲原生质体融合选育米曲霉新菌株的研究 J中国酿造， 2008， 19： 42-44 5李立风 ,潘力 ,彭昶 ,叶燕锐 .基因组改组 :几株同源酱油曲霉的多亲株电融合育种 J中国调味品 2007， 7： 14-18 6芦志龙，吴冰，袁尔东等 . 基因组改组技术及其在微生物育种中的应用研究进展 J生物技术 通报 2008 增刊 7王国良 .对小猿叶甲高毒力烟曲霉菌株的选育技术 J中国生物防治， 2008， 24(2)： 182-185
