精选优质文档-倾情为你奉上BrdU免疫荧光取第三代细胞接种于六孔板中，在接种的基础培养基中加入BrdU(终浓度为20mol/ml), 3d后将细胞爬片行BrdU免疫荧光染色，倒置荧光显微镜观察。免疫荧光检测步骤如下：1）固定：PBS洗细胞爬片3次，每次5 min，4%多聚甲醛固定30 min；2）变性：将固定好的细胞爬片PBS洗3次，每次5 min（摇床转速60）；2 mol/L的HCl室温下变性60 min；3）中和：0.1 mol/L的硼酸钠（PH8.5）中和10 min, PBS冲洗10 min, 3次；4)孵一抗：用1% BSA溶液稀释抗BrdU抗体至终浓度为6g/ml，在细胞爬片上滴加150-300L，37湿盒中孵育60 min；将孵好一抗的细胞爬片PBS洗10min，3次；5)孵二抗：用1% BSA溶液按1:600稀释FITC结合的goat anti-rabbit二抗，37湿盒中孵育60 min，将孵好二抗的细胞爬片PBS洗3次，每次10 min，注意避光；6)染核：每张爬片200l浓度1ug/ml的DAPI溶液浸染3 min，PBS洗2次，
