精选优质文档-倾情为你奉上第二章 Enzymes第四节 DNA连接酶Ligase一、DNA连接酶的发现二. 连接条件必须是两条双链DNA。DNA3端有游离的-OH，5端有一个磷酸基团（P）。需要能量。三、连接反应的机理1、ATP（NAD+)提供激活的AMP。2、ATP与连接酶形成共价“连接酶-AMP”复合物，并释放出焦磷酸PPi。3、AMP与连接酶的赖氨酸e-氨基相连。4、AMP随后从连接酶的赖氨酸e-氨基转移到DNA一条链的5端P上，形成“DNA-腺苷酸”复合物。5、 3-OH对磷原子作亲核攻击，形成磷酸二脂键，释放出AMP。Ligase：只连“Nick切口”，不连“Gap缺口”四. 两种 DNA连接酶1. E. Coli DNA ligase来源：E.coli 适用：粘性末端（PEG与高浓度一价阳离子存在可连平末端）2. T4 ligase来源：T4 phage 适用：粘性末端 及 平末端T4 vs. E.coliT4 DNA ligase制备容易，价格
