精选优质文档-倾情为你奉上 蛋白过镍柱纯化的原理：Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有HIs(组蛋白)标签的碱性蛋结合，组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。在蛋白上样后，带有组氨酸标签的蛋白特异性结合到柱子里，其他的杂蛋白流出。Ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以也可以与咪唑结合这时候再用咪唑洗脱，梯度洗脱，咪唑竞争性结合到硫酸镍上，目的蛋白就被洗脱了，这时候收集浸出液，那么里面就是你要的目的蛋白，然后透析掉咪唑就行了。准备材料：各种buffer，Ni-柱以我纯化一个蛋白Iso为例，其最适buffer的pH为8.0，对应各种纯化buffer如下，我习惯实验前都配好。Lysis buffer: 20mM Tris-HCl buffer, 100mM NaCl, 10%(v/v)glycerol, 7mM 2-ME, pH8.0.Wash buffer: 20mM Tris-HCl buffer, 100mM NaCl, 10%(v/v)glycerol, 7mM 2-ME, 20mM imidazole, pH8.0.Elution b
