硝酸还原酶测定方法(共3页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上硝酸还原酶活力的测定1原理硝酸还原酶( nitrate reductase,NR ),是植物氮素同化的关键酶,它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐(NO3+NADH+H NO2+NAD+H 2 O )。产生的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸(或对氨基苯磺酰胺)及- 萘胺(或萘基乙烯二胺)在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下: 生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般单位鲜重以ug/(gh) 为单位。NR 的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单,适合快速、多组测定。离体法复杂,但重复性较好。 药品配制1) 0.1mol/L pH为7.5的磷酸缓冲液: 称取Na2HPO412H2O 30.0905g, NaH2 PO42H2O 2.4965g, 溶解并定容至1000ml.2) 0.2 mol/L KNO3溶液: 2.5275g KNO3用pH为7.5的磷酸缓冲液溶解并定容至100 ml.

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