转染详细步骤大攻略(共3页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上转染详细步骤大攻略范例-真核重组表达质粒pDsRed-N1-NS1在A549细胞中表达按上海索莱宝生物科技有限公司去内毒素质粒小提试剂盒说明书方法进行质粒抽提,测得质粒浓度为410.32ng/l。将培养的A549细胞铺板,待细胞密度长到90%左右时,按lipo2000说明书转染A549细胞,36h后于荧光显微镜下观察DsRed-NS1融合蛋白的表达情况。具体操作步骤如下:1)质粒准备按上海索莱宝生物科技有限公司去内毒素质粒小提试剂盒说明书方法进行质粒抽提,具体步骤如下: (1) 取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1 min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。(2) 向留有菌体沉淀的离心管中加入200l溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。(注:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低)(3)向离心管中加入200l溶液P2,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。(注:混匀一定要温和,以免污染基因组

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