重组DNA分子的酶切、连接、转化和筛选(共7页).doc

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资源描述

精选优质文档-倾情为你奉上重组DNA分子的酶切、连接、转化和筛选摘 要:本实验利用酶切后的目的片段(500bp)与puc18为材料,运用氯化钙法制备感受态细胞和外源的重组体DNA转入受体菌细胞,经过筛选培养基筛选后得到重组子。关键词:酶切 重组 筛选前 言 重组克隆是指含有外源DNA的细胞增殖而产生的细胞群体,或由其经生长、发育和再生而形成的组织、器官、个体。重组克隆的筛选主要依靠DNA载体上的选择标记,加上合适的选择(培养)条件来进行。一是通过选择培养基使只有带外源DNA的细胞才能生长;二是根据选择性遗传标记选择带有目的基因的细胞克隆。1材料与方法1.1材料质粒DNA、目的DNA、E.coli受菌体、质粒pUC18、重组体DNA1.2方法1.2.1PCR法扩增目的片段(CER3A)1.2.1.1 PCR反应体系反应物体积/ulPCR Taq mix12.5CER3Ar,CER3Af各1dd水9.5质粒CER3A11.2.1.2 PCR扩增条件 在PCR仪上设计945min,然后进入循环,循

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