精选优质文档-倾情为你奉上2.1.1 酵母双杂交2.1.1.1 Gateway入门克隆设计Gateway引物时，在上游引物的5端加上B1序列：GGGG-ACA-AGT-TTG-TAC -AAA-AAA-GCA-GGC-TNN-，下游引物的5端加上B2序列：GGGG-ACC-ACT-TTG-T AC-AAG-AAA-GCT-GGG-TN-。其中，5-GGGG序列是保护碱基，防止引物的重要部分被降解，下划线加粗的部分是在整个的Gateway克隆中可以保存下来的序列，3端的碱基N是为了保证经过入门载体构建目的载体时阅读框的正确性，一般建议为C。通过PCR扩增获得带有attB位点的基因片段，扩增体系和条件见3.2.2.2，其中将退火温度改为65。获得扩增产物后对其进行回收纯化，测定纯化后DNA的质量和浓度后进行下一步的BP反应，反应体系如下：attB-PCR产物（10 ng/L）1-7LpDONR221 (150 ng/L)1LTE buffer, pH 8.0补足8L将上述混合物加入离心管中，加入2L BP反应酶，加
