组织染色质免疫沉淀技术(chip)-步骤(共2页).doc

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资源描述

精选优质文档-倾情为你奉上Chip步骤组织裂解:1. 新鲜组织。切成1-3 mm3小块。2. 转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.3. 加甲醛至终浓度为1%。室温下转动1520mins。(10ul)4. 加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4C下转动10mins。(0.5ml)5. 100 g, 4C 离心样本5mins。6. 弃上清,取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离心弃上清。7. 再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。1000 rpm,4C ,离心5 min。弃上清。8. 细胞裂解液重悬细胞。加入蛋白酶抑制剂PMSF (10 ul per ml), aprotinin (1 ul per ml) and leupeptin (1 ul per ml).冰上孵育10-15mins9. 5,000 rpm ,4C离心5分钟。取沉淀10. 细胞核裂解液重悬细胞加入(8)中的蛋白酶抑制剂。冰上孵育10-20m

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