精选优质文档-倾情为你奉上大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法(Jin Quan-Wen Lab at XMU)一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备：第一天：1. 用枪头或接种环挑取单菌落，接种入盛有5ml LB液体培养基的中，可以准备两管。37C，220rpm，培养过夜（14-16个小时）。2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）和几个50ml离心管，以备第二天离心收集细菌用。3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细菌细胞用。第二天：1 取2-5ml过夜培养液，接入500ml LB (或2XTY)液体培养基中, 控制起始OD600 = 0,03-0,05。 37C，220rpm，振摇2-4小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.4时，停止培养。2 将菌液在冰上预冷30分钟。同时，开启离心机，预冷至4C。3 随后将菌液分装到250ml或500ml 预冷的离心瓶中，4C，4000rpm离心15分钟。4 弃上清液，先用少量（如20-50ml）灭菌的冰水重悬沉淀的细胞团，然后加水
