精选优质文档-倾情为你奉上免疫荧光技术操作步骤 直接免疫荧光法测抗原 基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。 试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4 荧光标记的抗体溶液:以 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 进行稀释 缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油 9 份+ pH9.2 0.2M 碳酸盐缓冲液 1 份配制 搪瓷桶三只(内有 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 1500ml) 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫) 荧光显微镜 玻片架 滤纸 37温箱等。 实验步骤 1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。 2. 滴加适当稀释的荧光标记(饱和浓度可以用滴度发或公式法算出)的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温30min 定时间(参考:30min)。 3. 取出玻片,置玻片架上,先用 0.01m