RD细胞复苏、传代、冻存(共2页).docx

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精选优质文档-倾情为你奉上RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操作1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37水浴中迅速摇晃解冻,加入 4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。 1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。 2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37培 养箱中消化 1-2 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM 条件下离心 4 min,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。 4. 将细胞悬液按 1:2

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