单个核细胞分离-冻存及复苏(共4页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上1、 外周血单个核细胞Ficoll分离:向Ficoll分层液离心管中加入稀释的血液样本,1500rpm,5min离心机离心;i用毛细吸管轻轻插入灰白色层,沿管壁轻轻吸出该层的单个核细胞,盛入另一支离心管中,将所得的单个核细胞悬液用5倍体积的Hanks液或RPMI-1640洗涤2次,1500rpm,5min;用细胞计数仪或血球计数板计数细胞,调整细胞至所需浓度;淋巴细胞浓度浓度(细胞数/mL)=四个大方格内细胞数/41042、 细胞冻存:(1)配制含10%DMSO或甘油、1020%小牛血清的冻存培养液;(2) 取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;(3)离心1000rpm,5min;(4)去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5106/ml1107/ml;(5) 将细胞分装入冻存管中,每管11.5 ml;(6)在冻存管上标明细胞的名称,冻存时

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