精选优质文档-倾情为你奉上 双荧光报告基因分析实验目的：研究转录因子的活性和调控元件的活性。实验原理：通过将感兴趣的目的基因转录调控元件构建到带荧光素酶（firefly luciferase）的表达载体，如pGL3，构建成报告基因质粒，使这段DNA序列调控luciferase的转录。然后将报告基因质粒转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，并加入底物荧光素后（luciferin），luciferase可以催化荧光素发出荧光，从而可以通过测量荧光值的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入Renilla荧光素酶的报告基因质粒作为内参，即双荧光报告系统。该实验可以用于研究转录因子对promoter或enhancer序列的调控，也可以用于研究受体活性，细胞内信号通路，或者microRNA对基因表达的调控。实验过程：1 质粒构建1.1载体的选择 常用的载体有pGL3系列，包括pGL3-basic(附图1a)，pGL3-promoter(附图1b)，pGL
