精选优质文档-倾情为你奉上1 pBait-AbAi载体的构建（酵母报道子的构建）注：酵母报道子（pBait-AbAi）包含目的顺式作用元件的一个或多个拷贝，且插入到pAbAi载体AbAir报告基因的上游。大量研究表明最有效的构建应包含目的DNA三个以上的首尾连接的拷贝。首尾连接的拷贝产生方式很多，但对于长度小于20 bp的调控元件，人工合成寡核苷酸是最方便可靠的途径。（1） 设计并合成包含目的序列的两条反向平行的寡核苷酸序列，且两端加上与pAbAi载体酶切产物一致的粘性末端（建议合成一个目的序列的突变序列作为对照，以排除可能的假阳性）。（2） 用TE buffer溶解寡核苷酸至终浓度100 mmol/L。（3） 将正向链和反向链按照1:1的比例混合（退火后的双链寡核苷酸最大浓度为50 mmol/L）。（4） 95 C保温30 s，去除二级结构。（5） 72 C保温2 min，37 C保温2 min，25 C保温2min。注：缓慢退火，有助于双链寡核苷酸的形成。（6） 冰上放置。退火后的产物可贮存在-20 C冰箱备用。（7） 酶切
