目的基因的克隆转化及重组子筛选(共9页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上实验报告 题目:单元二:目的基因的克隆、转化及重组子筛选 指导老师:丛佩清 日期:2013/10/24-2013/10/26一实验目的：(1)学习和掌握DNA片段胶回收的方法。(2)学习DNA连接的有关技术。(3)掌握用CaCl2 法制备感受态细胞的原理和方法。(4)学习和掌握质粒DNA的转化和重组质粒的筛选方法。(5)掌握质粒提取的基本方法。(6)学习和掌握限制性内切酶的使用方法。二实验原理：(1) cDNA的TA克隆:Taq酶能够在PCR产物的3末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有 3T突出端的载体，在连接酶作用下，通过粘性末端连接，把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，称为 T-A克隆。可用于PCR产物的克隆和测序。(2) 感受态细胞制备原理：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态,细菌处于0，CaCl2 的低渗溶液中，细胞膨胀，细胞壁通透性增强,在冷热变化刺