精选优质文档-倾情为你奉上本氏烟草(N. benthamian)瞬时表达及相关实验方法:一、 农杆菌介导的烟草瞬时转化:A、 实验步骤:1、 根据实验需要,将所要表达的基因克隆到含有不同标签的双元载体中,并转化农杆菌。2、 将新活化的农杆菌单克隆接种到含有相应抗生素的YEP中,28,200rpm过夜。*估算时间,防止农杆菌液浓度超过1OD,否则会影响转化效率。3、当菌液OD值介于0.61.0之间时,1000g,5min离心收集农杆菌。4、用2ml Induction medium(without AS) 轻柔重悬农杆菌,然后再次离心收集菌液。5、重复步骤4。6、所得沉淀用1ml Induction medium 重悬。7、室温放置14小时8、测OD值,根据实验需要,配置侵染液(组合详见下文)。9、 用不加针头的注射器将侵染液注射进68周大的本氏烟草叶片中。*使用注射器时注意安全,防止针头扎到手,使用完的注射器要把针头套套上再扔,或者将针头放到注射器里面,避免伤害他人;注射时应戴乳胶手套并在每次注射完成后清洗手套,