蛋白表达纯化步骤(共5页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上一 证明目的蛋白有表达1 挑取一单菌落接种于含(AMP,终浓度为100g/ml)的3ml液体LB培养基中37,250rpm培养过夜。2 将过夜培养菌液以1:100转接于含抗生素的100ml液体LB中,37,250rpm 3.5h(大量培养至OD600=0.6左右)3 取出1ml菌液为未诱导的电泳对照,剩余培养物加入IPTG至终浓度为1mmol/L。继续震荡培养4h。4 以未诱导菌液与IPTG诱导后菌液做对比,SDS-PAGE检测。结果如图一1未诱导 2未诱导 3诱导后 4诱导后 二 表达的情况,是可溶还是沉淀1 将上述的37诱导的菌液离心(4,12000,5min),弃上清(LB培养液),沉淀重悬于0.9% NaCl溶液洗菌。2 重悬于0.9% NaCl溶液的菌体离心,(4,12000,5min),弃上清(0.9% NaCl溶液),得菌体,称菌体重量,悬于8ml PBS(PH7.0)缓冲液,缓冲液用量根据50100mg/ml的菌液终浓度。3 超声波破菌:冰浴条件下,超声波破碎大肠杆

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