精选优质文档-倾情为你奉上基因过表达实验设计思路及详细步骤在使用载体法针对某一基因进行过表达研究过程中，通常会遇到如下几个问题：实验对照组的确立、细胞转染条件的确定、基因表达效率的检测。1、 实验对照组的确立在一个完善的基因过表达实验设计中，必须考虑设立正确合理的实验对照组。通常，这些对照组包括阴性对照、转染试剂对照。阴性对照通常是用基因过表达选择的载体对应的空载体来作为对照。2、 摸索转染条件1、293T细胞在6cm dish中培养至80-90%融合时，倾去培养液，用3mL PBS洗涤细胞两次。2、加1mL Trypsin-EDTA solution,混匀后，小心吸去胰酶溶液，37C放置3分钟。3、再加入2 mL含10% FBS的DMEM培养液，吹打使细胞形成单细胞悬液。4、血球计数板计数，将细胞稀释至3105细胞/mL。5、按5103细胞/孔的浓度接种96孔板，混匀后于37C5% CO2培养24h。6、转染试剂Lipofectamin2000用于转染过表达质粒，剂量如下，每个剂量设三复孔。Lipo(L)0.20.30.4质粒(g)0.20
