精选优质文档-倾情为你奉上Sp二步法步骤啊,具体如下：一、 1 烤片，65，2 小时；二、 二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯I 20min - 二甲苯II 20 min无水乙醇I 15min 无水乙醇II 15min - 95%乙醇10min- 80%乙醇10min- 70%乙醇10min 双蒸水10min三、 阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37 孵育10min，PBS冲洗3X5min；四、 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液（PH 6.0）中用煮沸（95，1520min），自然冷却20min 以上，至室温，PBS冲洗3X5min。五、 正常羊血清工作液封闭，3710 min，倾去勿洗.六、 滴加适当比例稀释的一抗4 冰箱孵育过夜或37孵育23 小时，PBS冲洗3X5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；七、 滴加生物素标记的二抗, 37孵育15min, PBS冲洗3X5min;八、 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37孵育 15min, PBS冲洗3X5m
